六味地黄丸增强黑色素瘤自杀基因系统旁观者效应的体外研究.docx

文档介绍：六味地黄丸增强黑色素瘤自杀基因系统旁观者效应的体外研究
【摘要】 【目的】探讨六味地黄丸含药血清对单纯疱疹病毒核苷激酶/丙氧鸟苷(HSV滂tk/GCV)系统杀伤小螓鼠黑色素细胞瘤B16细胞株的增效作用,为提高临床攫基因治疗肿瘤疗效提供新思Μ路。【方法】构建并鉴定恶馅性黑色素瘤B16细胞HS辉Vtk/GCV治疗系统墼,制备六味地黄丸含药血清葳及对照血清,将B16、B谴16/tk细胞按20%(诜1∶4)的比例混合制成细丝胞悬浮液接种于96孔培养状板上,分为对照血清组、含杵药血清组、对照血清联合G舱CV组、含药血清联合GC侨V组,其中含药血清组及含读药血清联合GCV组按血清肚体积分数计又分高(10%秉)、中(5%)、低(2澌5%)3组,GCV的终浓虹度为25 μmol/L,ヰ按分组添加相应的含药血清f,每孔培养液总体积200檠 μL,37℃、体积分数彭5%的CO2培养箱培养。巛48 h后采用四甲基偶氮索唑盐(MTT)法检测杀伤ヴ效应。采用金正钧Q值法分析六味地黄丸含药血清与自杀基因治疗系统联合作用对珉旁观者效应是否具有协同性簧。【结果】MTT实验表明籀联合用药组对B16细胞的耍抑制率明显高于其他组,六桡味地黄丸含药血清对B16细胞株HSVtk/GC虽V系统的增效作用存在量效键关系:25%、5%、1喈0%含药血清联合20%t邂k/GCV组的实际抑制率(4875%、5939%、6928%)显著潦高于理论抑制率(381拎3%、3867%、3992%),金正钧Q值分鹩别为128、154、
衫174,均大于115芋,具有协同增效作用。【结众论】六味地黄丸含药血清对B16细胞株HSVtk∞/GCV系统旁观者效应有%明显的增效作用,且具有一樱定的量效关系。
【关键词黢】 六味地黄丸/药理学;ヵ自杀基因疗法;黑色素细胞摆/病理学;细胞培养
恶性断黑色素瘤被选择作为肿瘤基因治疗的第一个临床试用目曹标,经过近20年的摸索已さ取得了长足的进展,其中自缈杀基因疗法以其独特的旁观离者效应而备受青睐[1]。虏目前单纯疱疹病毒Ⅰ型核苷蟒激酶(HSV1tk)自纤杀基因治疗转移性恶性黑色挈素瘤已应用于Ⅰ/Ⅱ期的临鸽床研究[2],但仍存在转饥染效率低、靶向性不够、治稍疗载体的毒副作用等问题,烷使单纯自杀基因治疗难以完窆全治愈恶性黑色素瘤。联合笆治疗是提高自杀基因治疗疗恙效的方法之一。前期实验表装明[3]滋阴补肾经典名方槌六味地黄丸对小鼠移植性恶性黑色素瘤自杀基因治疗具有增效作用,本研究拟通过讧体外实验进一步论证,在构妃建黑色素瘤B16细胞HS陶V1tk自杀基因治疗系徵统的基础上观察六味地黄丸对其旁观者效应是否具有增摅效作用,现将结果报道如下硷。
1材料与方法
11赡实验动物及细胞SD大鼠,唾体质量200~220 g材,雄性,健康,SPF级,┘广州中医药大学实验动物中心提供, 合格证号:SC
龊XK(粤)XX0001开,粤监证字:XXA024呀;小鼠恶性黑色素瘤细胞株嫌B16购于中山大学动物中喻心细胞库。
12试剂及揿耗材细胞培养用RPMI篓1640粉和25 g/L含乙二胺四乙酸(EDT伐A)胰酶为Gibco公司蛐产品,新生牛血清为奥地利贿 PAA公司产品,青、链纱霉素合剂为杭州吉诺生物医筢药技术有限公司