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代谢所必需的,CO的2222主要作用是维持培养液的pH。进行细胞培养时,通常采用培养皿或松盖培养瓶,将其置于含95%空气加5%CO的混合气体的培养箱中进行培养。。许多有重要价值的生物制品,如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体。,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。。由于动物胚胎细胞分化程度低,恢复其全能性相对容易,而动物体细胞分化程度高,恢复其全能性十分困难,因此,动物体细胞核移植的难度也就明显高于胚胎细胞核移植。,转基因克隆动物可以作为生物反应器,生产许多珍贵的医用蛋白;在治疗人类疾病时,转基因克隆动物细胞、组织和器官可以作为异种移植的供体;人的核移植胚胎干细胞经过诱导分化,形成相应的组织、器官后,可以用于组织器官的移植。,如体型过大、异常肥胖、发育困难、脏器缺陷、免疫失调等。对克隆动物食品的安全性问题也存有争议。:..。(cellfusion)也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程,融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞。,常用的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。。,所得到的融合细胞就能大量增殖,产生足够数量的特定抗体。,再用特定的选择性培养基进行筛选。在该培养基上,未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡,只有融合的杂种细胞才能生长。这种杂种细胞的特点是既能迅速大量繁殖,又能产生专一的抗体。,还需进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选,就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后,将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养,或注射到小鼠腹腔内增殖,这样,从细胞培养液或小鼠腹水中,就可以提取出大量的单克隆抗体了。、灵敏度高,并可能大量制备。,它在多种人类疾病及动植物病害的诊断和病原鉴定中发挥着重要的作用。、特异性强,所以能准确地识别各种抗原物质的细微差异,并跟一定抗原发生特异性结合,因此,单克隆杭体在诊断的应用上,具有准确、高效、简易、快速的优点。(相当于人的青春期)开始,直到生殖机能衰退,在睾丸的曲细精管内不断进行着生殖细胞的增殖,源源不断地产生精子。:..,位于曲细精管管壁的精原细胞进行数次有丝分裂,产生大量的精原细胞,其中部分精原细胞经过染色体复制和其他物质的合成,进一步形成初级精母细胞。第二阶段,初级精母细胞连续进行两次分裂(即减数分裂,包括Ⅰ和MⅡ);第一次分裂产生两个次级精母细胞,每个次级精母细胞再分裂一次产生两个含单倍染色体的精子细胞。第三阶段,圆形的精子细胞经过变形其中的细胞核变为精子头的主要部分,高尔基体发育为头部的顶体,中心体演变为精子的尾,线粒体聚集在尾的基部形成线粒体鞘。不同种动物精子的形态相似,大小略有不同,与动物的体型大小无关。(oogenesis)是在雌性动物的卵巢内完成的。动物的胚胎在性别分化以后,雌性胎儿卵巢内的卵原细胞,就通过有丝分裂的方式不断增加其数量,并进一步演变为初级卵母细胞。,其结果产生一个次级卵母细胞和第一极体,进入输卵管,准备与精子受精。减数第二次分裂是在精子和卵子结合的过程中完成的,次级卵母细胞经分裂产生一个成熟的卵子和第二极体。当在卵细胞膜和透明带的间隙可以观察到两个极体时,说明卵子已经完成了受精,这是判断卵子是否受精的重要标志。受精作用完成的标志是雌、雄原核的融合。,受精是在雌性的输卵管内完成的。刚刚排出的精子,不能立即与卵子受精,必须在雌性动物生殖道发生相应的生理变化后,才能获得受精能力。1951年,张明觉和奥斯汀发现了这一生理现象,并把它称为“精子获能”(capacitation)。这一发现加速了科学家对精子获能机理的研究,并且找到了使精子在体外获能的物质,实现了各种哺乳动物精子在体外条件下的获能。,有的可能是初级卵母细胞,如马、犬等,有的可能是次级卵母细胞,如猪、羊等。但它们都要在输卵管内进一步成熟,当达到减数第二次分裂的中期时,才具备与精子受精的能力。:精子穿越放射冠和透明带,进入卵细胞膜,原核形成和融合。获能后的精子与卵子相遇时,首先发生顶体反应,使顶体内的酶释放出来。放射冠是包围在卵子透明带外而的卵丘细胞群,精子所释放的顶体酶可直接溶解卵丘细胞:..,顶体酶随后将透明带溶出一条孔道,精子借自身运动穿越透明带,并接触卵细胞膜。在精子触及卵细胞膜的瞬间,会产生阻止后来的精子进入透明带的生理反应,这个反应称做透明带应,它是防止多个精子进入透明带,引起多精子入卵受精的第一道屏障。,卵细胞膜会立即发生一种生理反应,拒绝其他精子再进人卵内,这种生理反应称做卵细胞膜反应。这是防止多精入卵受精的第二道屏障。,是尾部脱离,并且原有的核膜破裂;随后,精子形成一个新的核膜,最后形成一个比原来精子核还大的核,叫做雄原核。与此同时,精子入卵后被激活的卵子完成减数第二次分裂,排出第二极体后,形成雌原核,雌原核一般略小于雄原核。,开始发育。胚胎发育的早期有一段时间是在透明带内进行的,这一时期称为卵裂期。其特点是:细胞分裂方式为有丝分裂,细胞的数量不断增加,但胚胎的总体积并不增加,或略有缩小。,胚胎形成致密的细胞团,形似桑椹,叫做桑椹胚。实验证实,这一阶段前的每一个细胞都具有发育成完整胚胎的潜能,属于全能细胞。,细胞开始出现分化。聚集在胚胎一端,个体较大的细胞,称为内细胞团,将来发育成胎儿的各种组织,而沿透明带内壁扩展和排列的、个体较小的细胞,称为滋养层细胞,它们将来发育成胎膜和胎盘。随着胚胎的进一步发育,胚胎的内部出现了含有液体的囊腔——囊胚腔,这个时期的胚胎叫做囊胚。囊胚进一步扩大,会导致透明带的破裂,胚胎从其中伸展出来,这一过程叫做孵化。,再进一步发育,内细胞团表层的细胞形成外胚层,下方的细胞形成内胚层。这时的胚胎称为原肠胚,由内胚层包围的囊腔叫做原肠腔。滋养层则发育为胎儿的胎膜和胎盘。:细胞分裂的最初阶段为有丝分裂,不断增加生殖原细胞的数量,将过两次减数分裂,才能形成精子和卵子。不同点是:一个精原细胞分裂最后可以产生多个精子,一个卵原细胞最后只能产生一个卵子,精子的形状:..时期)完成的,这是精子和卵子在发生上的重要区别。,并通过培养发育为早期胚胎后,再经移植产生后代的技术。、精子的获取和受精等几个主要步骤。、兔以及家畜猪、羊等,采用的主要方法是:用促性腺激素处理,使其排出更多的卵子,然后,从输卵管中冲取卵子,直接与获能的精子在体外受精。,如牛,采用的方法是:从屠宰场已屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞,也可以借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜等工具,直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。人工培养成熟后,才能与获能的精子受精。胚胎移植对充分发挥优良母畜的繁殖潜力具有重要意义。***法、手握法和电刺激法等。在体外受精前,要对精子进行获能处理。通常采用的体外获能方法有培养法和化学诱导法两种:对于啮齿动物、家兔和猪等动物的精子,一般采用培养法,即将取自附睾的精子,放入人工配制的获能液中,培养一段时间后,精子就可获能;对于牛、羊等家畜的精子常采用化学法,即将精子放在一定浓度的肝素或钙离子载体A23187液中,用化学药物诱导精子获能。,一般情况下都可以在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。,除一些无机盐和有机盐类外,还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分,以及血清等物质。,可将其取出向受体移植,或冷冻保存。(embryotransfer)是指将雌性动物体内的早期胚胎,或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎,移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内,使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体成为“供体”(doner),接受胚胎的个体叫“受体”(recipient)。:..胚胎移植又是胚胎工程其他技术的最后一道“工序”。进行胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。供体的主要职能变为只生产具有优良遗传特性的胚胎,繁重而漫长的妊娠和育仔的任务由受体取代,这就大大缩短了供体本身的繁殖周期。,与供体和受体的生理状况有关。第一,哺乳动物发情排卵后,不管是否妊娠,在一段时间内,同种动物的供、受体***官的生理变化是相同的,这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。第二,哺乳动物的早期胚胎形成后,在一定时间内不会与母体子宫建立组织上的联系,而是处于游离状态,这就为胚胎的收集提供了可能。第三,大量的研究已经证明,受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应,这为胚胎在受体内的存活提供了可能。第四,供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但移入受体的供体胚胎的遗传特性,在孕育过程中不受任何影响。,胚胎移植主要包括对供、受体的选择和处理,配种或进行人工授精,对胚胎的收集、检查、培养或保存,对胚胎进行移植,以及移植后的检查等步骤。(embryosplitting)是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等,,因此,胚胎分割可以看做动物无性繁殖或克隆的方法之一。。进行胚胎分割时,应选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚,将其移入盛有操作液的培养皿中,然后,用分割针或分割刀进行分割。对于不同发育阶段的胚胎,分割的具体操作不完全相同。,要注意将内细胞团均等分割,否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。,如刚出生的动物体重偏低,毛色和斑纹上还存在差异等。实践证明,采用胚胎分割技术产生同卵多胚的可能:..都很小。(embryonicstemcell)简称ES或EK细胞,是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞。ES细胞具有胚胎细胞的特性,在形态上,表现为体积小、细胞核大、核仁明显;在功能上,具有发育的全能性,即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外,在体外培养的条件下,ES细胞