文档介绍：该【多肽标签在重组蛋白纯化和检测中的应用 】是由【1781111****】上传分享，文档一共【7】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【多肽标签在重组蛋白纯化和检测中的应用 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。标签是一种由六个组氨酸残基组成的融合标签,可以插入在目的蛋白的N端或C端。His标签的优点是可以利用组氨酸残基与金属离子的亲和力,通过固定化金属螯合亲和层析(IMAC)实现对重组蛋白的高效纯化。His标签的分子量小,一般不影响目的蛋白的功能和结构,而且可以在非变性或变性条件下进行纯化。His标签也可以用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究,以及抗体制备。His标签的结构:His标签由六个组氨酸残基组成,其氨基酸序列为HHHHHH,。His标签可以与镍、钴、铜等金属离子形成配位键,从而实现亲和层析。?His标签的纯化方法:His标签蛋白的纯化方法主要有两种,一种是通过含有金属离子的琼脂糖凝胶柱进行纯化,另一种是通过含有金属离子的磁珠进行纯化。两种方法都需要用含有金属离子的缓冲液进行平衡和洗涤,用含有高浓度亲和配体(如咪唑)或低pH值的缓冲液进行洗脱。?His标签的应用范围:His标签蛋白可以用于各种生物学研究,例如:蛋白质-蛋白质相互作用:可以利用His标签与金属离子之间的亲和力,将目的蛋白固定在金属离子表面,然后与其他蛋白质进行结合实验,例如ELISA、Westernblot、免疫沉淀等。相互作用:可以利用His标签与金属离子之间的亲和力,将目的蛋白固定在金属离子表面,然后与DNA进行结合实验,例如EMSA、DNaseIfootprinting、ChIP等。o抗体制备:可以利用His标签作为抗原刺激动物产生抗体,或者利用抗His抗体作为二抗进行检测。标签Flag标签是一种由八个氨基酸(DYKDDDDK)组成的亲水性多肽,可以融合在目的蛋白的N端或C端。Flag标签的优点是可以利用其高度特异性和亲和力,通过抗Flag抗体进行重组蛋白的纯化和检测。Flag标签通常不会与目的蛋白相互作用,也不会影响目的蛋白的功能和性质。Flag标签可以在温和条件下进行纯化,也可以在N端被肠激酶切除。Flag标签的结构:Flag标签由八个氨基酸残基组成,其氨基酸序列为DYKDDDDK,。Flag标签可以与抗Flag抗体形成高亲和力的复合物,从而实现亲和层析。?Flag标签的纯化方法:Flag标签蛋白的纯化方法主是通过要含有抗Flag抗体的琼脂糖凝胶柱进行纯化,也可以通过含有抗Flag抗体的磁珠进行纯化。两种方法都需要用含有Flag肽的缓冲液进行洗脱,或者用肠激酶切除N端的Flag标签。?Flag标签的应用范围:Flag标签蛋白可以用于各种生物学研究,例如:抗体进行重组蛋白在细胞中的表达和定位的检测,例如Westernblot、免疫荧光、免疫组化等。o蛋白质相互作用:可以利用Flag标签与抗Flag抗体之间的亲和力,将目的蛋白固定在抗Flag抗体表面,然后与其他蛋白质进行结合实验,例如免疫沉淀、双杂交、质谱等。o抗体制备:可以利用Flag标签作为抗原刺激动物产生抗体,或者利用抗Flag抗体作为二抗进行检测。标签GST标签是一种由谷胱甘肽巯基转移酶(GST)组成的融合标签,大小约为26kDa,可以融合在目的蛋白的N端或C端。GST标签的优点是可以利用GST与谷胱甘肽(GSH)之间的亲和力,通过含有GSH的琼脂糖凝胶进行重组蛋白的纯化。GST标签可以增加重组蛋白在细菌中的表达量和溶解性,尤其是对于真核蛋白。GST标签也可以用于研究蛋白质相互作用,例如GST法。GST标签的结构:GST标签由谷胱甘肽巯基转移酶(GST)组成,是一种参与解毒反应的酶,大小约为26kDa。GST标签可以与谷胱甘肽(GSH)形成共价键或非共价键,从而实现亲和层析。?GST标签的纯化方法:GST标签蛋白的纯化方法主要是通过含有GSH的琼脂糖凝胶柱进行纯化,也可以通过含有GSH的磁珠进两种方法都需要用含有高浓度或低pH值的缓冲液进行洗脱。GST标签的应用范围:GST标签蛋白可以用于各种生物学研究,例如:蛋白质表达和溶解:可以利用GST标签增加重组蛋白在细菌中的表达量和溶解性,尤其是对于真核蛋白或易变性蛋白。o蛋白质相互作用:可以利用GST标签与GSH之间的亲和力,将目的蛋白固定在GSH表面,然后与其他蛋白质进行结合实验,例如GST拖珠法。GST拖珠法是一种常用的蛋白质相互作用研究方法,它可以通过将GST标签融合到一个已知或猜测的蛋白质结合伙伴上,然后用GSH磁珠或琼脂糖凝胶柱进行纯化,从而捕获与之相互作用的其他蛋白质。GST拖珠法的优点是可以在体外模拟体内的蛋白质相互作用,而且作操简单快速。标签HA标签是一种由九个氨基酸(YPYDVPDYA)组成的多肽,源于流感病毒的血凝素(HA)分子。HA标签可以融合在目的蛋白的N端或C端,对外源靶蛋白的空间结构影响小。HA标签可以利用抗HA抗体进行重组蛋白的检测和免疫沉淀,也可以利用HA肽进行重组蛋白的洗脱。HA标签由九个氨基酸残基组成,其氨基酸序列为YPYDVPDYA,。HA标签可以与抗HA抗体形成高亲和力的复合物,从而实现亲和层析。?HA标签的纯化方法:HA标签蛋白的纯化方法主要是通过含有抗HA抗体的琼脂糖凝胶柱进行纯化,也可以通过含有抗HA抗体的磁珠进行纯化。两种方法都需要用含有HA肽的缓冲液进行洗脱,或者用肠激酶切除N端的HA标签。?HA标签的应用范围:HA标签蛋白可以用于各种生物学研究,例如:蛋白质表达和定位:可以利用抗HA抗体进行重组蛋白在细胞中的表达和定位的检测,例如Westernblot、免疫荧光、免疫组化等。o蛋白质相互作用:可以利用HA标签与抗HA抗体之间的亲和力,将目的蛋白固定在抗HA抗体表面,然后与其他蛋白质进行合实结验,例如免疫沉淀、双杂交、质谱等。o抗体制备:可以利用HA标签作为抗原刺激动物产生抗体,或者利用抗HA抗体作为二抗进行检测。标签Myc标签是一种由十一个氨基酸(EQKLISEEDL)组成的多肽,源于c-Myc转录因子。Myc标签可以放置在目的蛋白的N端或C端,作为一标签可以利用抗Myc抗体进行重组蛋白在细胞中的表达、定位和相互作用研究。Myc标签的结构:Myc标签由十一个氨基酸残基组成,其氨基酸序列为EQKLISEEDL,。Myc标签可以与抗Myc抗体形成高亲和力的复合物,从而实现亲和层析。?Myc标签的纯化方法:Myc标签蛋白的纯化方法主要是通过含有抗Myc抗体的琼脂糖凝胶柱进行纯化,也可以通过含有抗Myc抗体的磁珠进行纯化。两种方法都需要用含有Myc肽或低pH值的缓冲液进行洗脱。?Myc标签的应用范围:Myc标签蛋白可以用于各种生物学研究,例如:蛋白质表达和定位:可以利用抗Myc抗体进行重组蛋白在细胞中的表达和定位的检测,例如Westernblot、免疫荧光、免疫组化等。o蛋白质相互作用:可以利用Myc标签与抗Myc抗体之间的亲和力,将目的蛋白固定在抗Myc抗体表面,然后与其他蛋白质进行结合实验,例如免疫沉、淀双杂交、质谱等。o抗体制备:可以利用Myc标签作为抗原刺激动物产生抗体,或者利用抗Myc抗体作为二抗进行检测。其他多肽标签除了上述常用的多肽标签外,还有一些其他类型的多肽标签,例如:定性,通过交联淀粉亲和层析进行纯化。?Strep(链霉亲和素)标签,可以利用生物素和链霉亲和素之间的高亲和力,通过生物素化琼脂糖凝胶进行纯化。?SUMO(小泛素样修饰蛋白)标签,可以增强重组蛋白的表达、溶解性和稳定性,通过SUMO特异性蛋白酶进行切除。