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】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。:..生物化学实验报告实验一糖类的性质实验(一)糖类的颜色反响一、实验目的1、认识糖类某些颜色反响的原理。2、学****应用糖的颜色反响鉴识糖类的方法。二、颜色反响(一)α-萘酚反响1、原理糖在浓无机酸(硫酸、盐酸)作用下,脱水生成糠醛及糠醛衍生物,后者能与α-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反响均呈阳性,故此反响不是糖类的特异反响。2、器械试管及试管架,滴管3、试剂莫氏试剂:5%α--萘酚5g,溶于95%酒精中,整体积达100mL,贮于棕色瓶内。用前配制。1%葡萄糖溶液100mL1%果糖溶液100mL1%蔗糖溶液100mL1%淀粉溶液100mL%糠醛溶液100mL浓硫酸500mL4、实验操作取5支试管,分别加入1%葡萄糖溶液、1%果糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、%糠醛溶液各1mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂,充足混淆。倾斜试管,当心地沿试管壁加入浓硫酸1mL,慢慢立起试管,切勿摇动。察看记录各管颜色。(二)间苯二酚反响1、原理在酸作用下,***醣脱水生成羟***糠醛,后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反响是***醣的特异反响。醛糖在相同条件下呈色反响迟缓,只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时,才呈轻微的阳性反响。实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反响。2、器械试管及试管架,滴管3、试剂塞氏试剂:%间苯二酚-盐酸溶液1000mL,,再用蒸馏水稀至1000mL。1%葡萄糖溶液100mL1%果糖溶液100mL1%蔗糖溶液100mL4、实验操作1/17:..生物化学实验报告取3试管,分别加入1%葡萄糖溶液、1%果糖溶液、1%蔗糖溶液各mL。再向3支试管中各加入塞氏试剂5mL,充足混淆。将试管同时放入开水浴中,。察看记录各管颜色。(二)糖类的复原作用一、实验目的1、理解并掌握糖类的复原性质;2、学****常用的判定糖类复原性的方法。3、认识斐林氏、本尼迪克特试法查验糖的原理。二、实验原理复原糖是指含有自由醛基(如葡萄糖)或***基(假如糖)的单糖和某些二糖(如乳糖和麦芽糖)。在碱性溶液中,复原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子复原,而糖自己被氧化成糖酸及其余产物。糖类的这类性质常被用于糖的定性和定量测定。三、器械试管及试管架,水浴锅电炉四、。。2本尼迪克特试剂31%葡萄糖溶液100mL41%果糖溶液100mL5、1%蔗糖溶液100mL五实验操作六思虑题1、斐林氏、本尼迪克特试法查验糖的原理是什么2、试比较斐林氏、本尼迪克特试法的方法。2/17:..生物化学实验报告实验二总糖的测定---蒽***比色法一、实验目的掌握蒽***法测定可溶性糖含量的原理和方法。二、实验原理强酸可使糖类脱水生成糠醛,生成的糠醛或羟***糖醛与蒽***脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色,该物质在620nm处有最大汲取。在10-100ug范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的敏捷度,糖含量在30ug左右就能进行测定,所以可做为微量测糖之用。一般样品少的状况下,采纳这一方法比较适合。三、仪器、(1)分光光度计(2)电子顶载天平(3)三角瓶:50m1X1(4)大试管:9支(5)试管架,试管夹(6)漏斗,漏斗架(7)容量瓶:50m1X2(8)刻度吸管:1m1X3,2m1X1,5mlX1(9)(1)葡萄糖标准液:l00ug/ml(2)浓硫酸(3)蒽***试剂:蒽***溶于100ml浓HSO中当天配制使用。(或许其余资料)。四、,按下表数据配制一系列不一样浓度的葡萄糖溶液:管号1234567葡萄糖标准液0(ml)蒸馏水(ml)1葡萄糖含量(ug)0102030406080在每支试管中立刻加入蒽***试剂,快速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一同浸于开水浴中,管口加盖玻璃球,以防蒸发。自水浴从头煮沸起,正确煮沸l0min拿出,用流水冷却,室温搁置10min,在620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量(ug)作横坐标,以吸光值作纵坐标,作出标准曲线。,正确称取1g,放入50m1三角瓶中,加开水25m1,在水浴中加盖煮沸10min,冷却后过滤,滤液采集在50m1容量瓶中,3/17:..生物化学实验报告定容至刻度。汲取提取液2m1,置另一50m1容量瓶中,以蒸馏水稀释定容,摇匀测定。,加入蒽***试剂,以下操作同标准曲线制作。比色波长620nm,记录吸光度,在标准曲线上查出葡萄糖的含量(ug)。查表所得糖含量(ug)×稀释倍数五、结果办理六、注意事项1该显色反响特别敏捷,溶液中切勿混入纸屑及灰尘。2HSO要用高纯度的。243不一样糖类与蒽***的显色有差别,稳固性也不一样。加热、比色时间应严格掌握。七、思虑题1蒽***比色测定糖的原理是什么2用水提取的糖类有哪些3制作葡萄糖标准曲线应注意哪些事项4分光光度计的原理是什么使用时需要注意哪些4/17:..生物化学实验报告实验三粗脂肪的提取和定量测定一实验目的1.?学****和掌握粗脂肪提取的原理和测定方法。2.?熟****和掌握重量剖析的基本操作,包含样品的办理、定量转移、烘干、恒重等。二实验原理本法为重量法,用脂肪溶剂将脂肪提出后进行称量。该法合用于固体和液体样品,往常将样品浸于脂肪溶剂,如***或沸点为30-60度的石油醚,借助于索氏提取管进行循环抽提。本法提取的脂溶性物质为脂肪近似物的混淆物,此中含有脂肪,游离脂肪酸,磷脂,酯,固醇,芬芳油,某些色素及有机酸等,所以,称为粗脂肪。用该法测定样品含油量时,往常采纳沸点低于60度的有机溶剂,此时,样品中联合状态的脂类(脂蛋白)不可以直接提拿出来,所以该法又称为游离脂类定量测定法。三仪器、,剖析天平,烧杯,烘箱,干燥器,恒温水浴,脱脂棉,脱脂滤纸,镊子2试剂和资料石油醚芝麻或许花生等油料种子。四、,烘干时需防止过热,冷却后正确地称取1克左右放入研钵中研碎,再用滤纸将样品包裹好放入索氏提取管内。注意勿使纸包内样品高于提取管的虹吸部分,研磨后的研钵应用滤纸擦净并将滤纸放入提取管内,用少许溶剂清洗研钵,,记下其重量。装入石油醚达提取瓶容积的一半,连结提取器各部分,不可以漏气(不可以用凡士林或真空脂)。加热提取:使石油醚每小时循环10-20次,约小时,用滤纸大略判断脂肪能否提取完整。蒸去石油醚,烘干至恒重。%=脂肪重÷样品重×100%思虑题1、索式提取法提取的为何是粗脂肪2、做好本试验应注意哪些事项3、本实验装置磨口处为何不可以涂抹凡士林或真空脂5/17:..生物化学实验报告实验四总氮量的测定——凯氏定氮法一、实验目的1、学****微量凯氏定氮法的原理2、掌握微量凯氏定氮法的操作技术,包含标准硫酸铵含量的测定,未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等。二、实验原理凯氏定氮法常用于测定天然有机物(如蛋白质,核酸及氮基酸等)的含氮量。天然的含氮有机物与浓硫酸共热时,此中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水,而氮则变为氨,并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此时程称之为“消化”。可是,这个反响进行得比较迟缓,往常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提升反响的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂,以促使反响的进行。浓碱可使消化液中的硫酸铵分解,游离出氮,借水蒸汽将产生的氨蒸馏到必定量,必定浓度的硼酸溶液中,硼酸汲取氨后,氨与溶液中的氢离子联合,生成铵离子,使溶液中氢离子浓度降低。而后用标准无机酸滴定,直至恢复溶液中本来氢离子浓度为止,最后依据所用标准酸的当量数(相当于待测物中氨的当量数)计算出待测物中的氮量。滴准时用甲烯蓝和***红混淆指示剂,其指示范围为,将NHHBO的蓝色滴423至本来HBO的蓝紫色即为终点。33本法合用范围毫克氮。相对偏差应小于2%。三、资料、试剂与用具(一)资料人的血清或猪的血清(二)试剂1、浓硫酸(化学纯)2、30%氢氧化钠(剖析纯)溶液3、%NaCl溶液4、硫酸钾—硫酸铜混淆物:硫酸钾与硫酸铜(CuSO、5HO)以3:1(W/W)42的配比混淆研磨成粉末。5、2%硼酸6、混淆指示剂的配制:方法一:取50毫升%甲烯蓝无水醇溶液与200毫升%***红无水乙醇溶液混淆配成,贮于棕色瓶备用,这类指示剂酸性时为紫色,碱性时为绿色,变色范围窄且敏捷。方法二:%溴甲酚绿乙醇溶液10毫升与%***红乙醇溶液2毫升混和即成。:取100毫升2%硼酸溶液,滴加混淆指示剂储备液,摇匀后溶液体现紫红色即可。(约加1毫升左右混淆指示剂)(毫克氮/毫升)(三)、用具6/17:..生物化学实验报告1、?凯氏烧瓶2、?消化架3、?吸量管(1毫升、2毫升)4、?量筒(10毫升)5、?凯氏定氮蒸馏装置6、?微量滴定管(3毫升、5毫升,可读至毫升)7、?锥形瓶(50-100毫升)8、?容量瓶(50毫升)四、操作步骤(一)样品的办理血清样品:取人血(或猪血),放于离心管中,于冰箱中搁置过液,第二天离心除掉凝血块,上层黄色透明清液即为血清。正确汲取血清毫升加入%NaCl毫升,认真混匀备用。固体样品:某一固体样品中的含氮量是100克该物质(干重中所含氮的克数)来表示(%)。所以在定氮前,应将固体样品中的水份除掉。一般样品干燥的温度都采纳105℃,因为非游离的水都不可以在100℃以下烘干。在称量瓶中称入必定量的磨碎的样品,而后置105℃的烘箱内干燥4小时。用坩埚将称量瓶放入干燥器内,待降至室温后称重,按上述操作持续烘干样品。每干燥1小时后,称量一次,直到两次称量的数目不变,即达恒重。(二)消化取2个50毫升的凯氏烧瓶,向第一号烧瓶内加2毫升稀释血清溶液(或4毫升核酸制品溶液,或200毫克固体粉末)。注意,用吸量管直接将溶液(或用试管加入固体样品)加至烧瓶底部,切勿沾于瓶口或瓶颈上,向2号烧瓶加入2毫升水作空白比较。在每个烧瓶内加入硫酸钾—,浓硫酸3毫升,小瓷片两粒,摇匀。将烧瓶约60度角固定在铁架上,每个瓶口放一小漏斗,在通风厨内的电炉上消化。在消化开始时,应控制火力,不要使液体冲到瓶颈。待瓶内水汽蒸完,硫酸开始分解并放出SO白烟后,适合增强火力,持续消化,直至消化液呈透明绿色为止。2消化完成,待烧瓶内容物冷却后,加蒸馏水10毫升(注意慢加,边加边摇)。冷却后将瓶内容物转入50毫升的容量瓶中,并用蒸馏水洗烧瓶数次,溶液一并倒入容量瓶,最后定容至刻度摇匀,做上记号备用。(三)蒸馏1、仪器的清洗:仪器应先经一般清洗,再经水蒸气清洗。蒸馏器有几种,应用前需熟****其使用方法。使用方法以下:开放自来水龙头,使水E进入G,从K管流出(水不宜开得过大免得水从G管溢出)。开放P,使水进入A室,漏斗D中加蒸馏水约10毫升入B室。用拇指将3管口按紧,同时开放P,则B室中的水先从Y型管口冲出,随后A室中水经K管1流出,一般状况下这样重复清洗两次即可。若蒸馏器内有氨存在,则应加入蒸馏水后,不加样品蒸馏一次方可使用。(可用PH试纸检查。)A为蒸气发生室,P为其开关,P为出水开关,B为蒸馏室,与出气室M相遇,31M管插入盛有定量酸液的锥形瓶,B室内有Y型管,一端与A室相通,另一端经P与漏斗D相连,可经此将样品及试剂加入B室,F为指形冷凝管,E为进水管,47/17:..生物化学实验报告水经F、G、K而流出,蒸馏时B室进消化好的样品及NaOH,两者反响产生氨,B室经M管进入锥形瓶中的酸汲取。2、滴定标准样品先用标准硫酸铵溶液试验2~3次。蒸馏器洗净后,开放水龙头P,使水进入A3室,水放至A室球部即可。取3个50毫升的锥形瓶,各正确加入10毫升硼酸(内加有混淆指示剂)。用表面皿覆盖备用。加样:用吸管汲取1毫升标准硫酸铵溶液,仔细地由漏斗D倾入蒸馏室,再用蒸馏水1毫升冲洗漏斗。取一个盛有硼酸—混淆指示剂的锥形瓶,置于M管下,使管口恰巧接触硼酸溶液,用量筒从漏斗D加入30%氢氧化钠8毫升,随马上P4夹紧,并往漏斗加入少许蒸馏水关闭。蒸馏:用酒精灯加热(应用挡风板将灯围拢,保持火力恒定,沸腾不行高于Y管口免得A室溶液从Y管倒吸,待第一滴蒸馏液从冷凝柱F顶端滴下时起,继续蒸馏5分钟,而后将锥形瓶放低,使导管走开液面再蒸2分钟,最后用蒸馏水洗导管外壁,蒸馏完成,取下锥形瓶,随马上蒸馏器洗净。)3、样品及空白蒸馏:用吸量管分别汲取1毫升样品和1毫升蒸馏水按上述操作步骤进行蒸馏。4、滴定:蒸馏完成,用标准盐酸溶液滴定锥瓶内溶液至淡紫色或灰色,记录所用盐酸的量。(四)计算若样品中除有蛋白外,另有其余含氮物质,则样品蛋白质含量的测定要更复杂一些。第一需向样品中加入三***乙酸,使其最后浓度为5%,而后测定未加三***乙酸的样品及加入三***乙酸后的样品的上清液中的含氮量,进而计算出蛋白氮,再进一步算出蛋白质的含量。蛋白氮=总氮—非蛋白氮蛋白质含量(克/%)=蛋白氮×五、注意事项1、凯氏法的长处是合用范围广,可用于动植物的各样组织,器官及食品等成组复杂样品的测定,只需仔细操作都能获取精准的结果。其弊端是操作比较复杂,含有大批碱性氨基酸的蛋白质测定结果偏高。2、一般实验室中的空气中常含有少许的氨,会影响结果,所以操作应在独自干净的房间中进行,并尽可能快地对硼酸汲取液进行滴定。七、思虑题1、正式测定未知样品前为何一定测定标准硫酸铵的含氮量及空白2、写出以下各步的化学反响式:①蛋白质消化②氨的蒸馏③。8/17:..生物化学实验报告实验五氨基酸分别判定——纸层析法一、实验目的经过氨基酸的分别,学****纸层析法的基来源理和操作方法。二、实验原理纸层析是以滤纸作支持物,用必定的溶剂系统睁开,使混淆样品达到分别剖析的层析方法。其一般操作是将样品溶解在适合溶剂中,点样在滤纸的一端;再采纳适合的溶剂系统,从点样的一端经过毛细现象向另一端睁开,睁开完成,拿出滤纸晾干或烘干,再以适合的显色剂或紫外灯、荧光灯下察看其图谱。样品经睁开后其一物质在纸层析谱上的地点常用比移值R来表示。f纸层析可看作是溶质(样品)在固定相与流动相之间的连续抽提,因为溶质在两相之间的分派系数不一样而达到分别。必定的物质在两相间有固定的分派系数,因此在恒定条件(液剂、PH、温度)下,各物质有固定的R值,据此可达到f剖析判定的目的。因为滤纸纤维可汲取20~25%的水分;且此中6~7%以氢键形式与纤维素上羟基联合,一般条件下难脱去;所以纸层析其实是以水相作固定相,睁开的溶剂作流动相。纸层析操作按溶剂睁开方向可分为上行、下行和径向三种。氨基酸分别一般用上行法。上行法又分单向(成分较为简单的样品)和双向(单向时斑点重叠分别不开,于是在其垂直方向用另一种溶剂系统展层)。双相层析谱可分辨十几种以上的样品。层析滤纸要求:(1)质地平均,平坦无折痕,厚薄适合,溶剂能匀速睁开。(2)机械强度好,溶剂睁开后能保持原状,不易折到。(3)有必定纯度而少杂质,免得影响层析图谱背景。(4)纤维松紧适合,一般采纳中速滤纸,或依据溶剂选择。如丁醇类粘度大,宜用快速滤纸;而***仿、石油醚睁开快,宜用慢速滤纸。层析溶剂要求:(1)被分别物质在该溶剂系统中R在~之间,各组分之R值相差最好能大于,ff免得斑点重叠。(2)溶剂系统中任一组分与分别物之间不可以起化学反响。(3)分别物质在溶剂系统中的分派较恒定,不随温度而变化,且易快速达到均衡,这样所得斑点较圆整。本实验采纳八种混淆氨基酸为样品,用酸性和碱性两种溶剂进行双向层析,以茚三***为显色剂,可获取分别清楚的层析图谱。三、试剂和器械1、试剂%(W/V)茚三***溶***液。溶剂系统:第一相:正丁醇∶88%甲酸∶水=15∶3∶2(V/V);第二相:正丁醇∶吡啶∶95%乙醇∶水=5∶1∶1∶1(V/V)。2、测试样品标准氨基酸混淆溶液:亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丙氨酸、天门9/17:..。3、器械层析缸25×40cm(×2);培育皿15cm(×2);喷雾器;;电吹风;烘箱。层析滤纸14×11cm;铅笔,尺。四、操作方法1、点样取层析滤纸一张(14×11cm),;再将纸转90°,。以毛细管汲取混淆氨基酸溶液,点与二线交点处,点的直径控制在2mm左右,不行过大。待样品干燥后再点一次。滤纸上点样斑点干燥后,把滤纸卷成圆筒形,纸的两边以铬丝相连,但不行重叠相碰。2、展层在层析缸中安稳的放入装有第一相层析溶剂的培育皿。将圆筒形滤纸放入,点样一段接触溶剂,以点样处不浸入溶剂为准。待溶剂自下而上平均睁开,,悬挂于室温中,以电吹风充足吹尽溶剂。而后裁去未走过溶剂的滤纸边沿,将滤纸转90°,卷成如前圆筒状,放入盛第二相溶剂的层析缸内睁开(操作同上),约1小时后溶剂睁开到距纸边时拿出,以电吹风吹尽溶剂使其干燥。3、显色以喷雾器将茚三***平均地喷在滤纸上,而后悬滤纸于65℃烘箱内加热20分钟,即可看到紫红色氨基酸斑点,将图谱上的斑点用铅笔圈出。五、注意事项(1)烘箱加热温度不行过高,且不行有氨的扰乱,不然图谱背景会泛红。(2)第一相溶剂最幸亏使用前再按比率混淆,不然会惹起酯化影响层析成效。(3)接触滤纸时,要戴手套。六、思虑题:1、什么叫纸层析法2、何谓R值影响R值的主要要素是什么ff3、如何制备扩展剂4、层析缸中均衡溶剂的作用是什么5、酸性与碱性溶剂系统对氨基酸极性基团的解离各有何影响:..蛋白质的性质实验实验(一)蛋白质的呈色反响一、。。、呈色反响:(一)双缩脲反响::尿素加热至180℃左右生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与cu2+联合生成紫红色化合物,此反响称为双缩脲反响。蛋白质分子中有肽键,其构造与双缩脲相像,也能发生此反响。可用于蛋白质的定性或定量测定。全部蛋白质或二肽以上的多肽部有双缩脲反响,但有双缩脲反响的物质不必定都是蛋白质或多肽。:(1)尿素:10克(2)10%氢氧化钠溶液250毫升(3)1%硫酸铜溶液60毫升(4)2%:取少许尿素结晶,放在干燥试管中。用微火加热使尿素融化。融化的尿素开始硬化时,停止加热,尿素放出氨,形成双缩脲。冷后,加10%氢氧化钠溶液约1毫升,振荡混匀,再加1%硫酸铜溶液1滴,再振荡。察看出现的粉红颜色。防止增添过度硫酸铜,不然,生成的蓝色氢氧化铜能掩饰粉红色。向另一试管加卵清蛋白溶液约l毫升和10%氢氧化钠溶液约2毫升,摇匀,再加1%硫酸铜溶液2滴,随加随摇,察看紫玫色的出现。(二)茚三***反响:..、羟脯氨酸和茚三***反响产生黄色物质外,所有α—氨基酸及全部蛋白质都能和茚三***反响生成蓝紫色物质。该反响十分敏捷,1:1500000浓度的氨基酸水溶液即能给出反响,是一种常用的氨基酸定量测定方法。茚三***反响分为两步,第一步是氨基酸被氧化形成CO、NH和醛,水合茚23三***被复原成复原型茚三***;第二步是所形成的复原型茚三***同另一个水合茚三***分于和氨缩合生成有色物质。反响机理以下:此反响的适合pH为5—7,同一浓度的蛋白质或氨基酸在不一样pH条件下的颜色深浅不一样,酸度过大时甚至不显色。:(1)蛋白质溶液100毫升2%卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液(蛋清:水=1:9)(2)%甘氨酸溶液80毫升(3)%茚三***水溶液50毫升(4)%茚三***—::..(1)2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升,再各加毫升%茚三***水溶液,混匀,在开水浴中加热1—2分钟,察看颜色由粉色变紫红色再变蓝。(2)在一小块滤纸上滴一滴%的甘氨酸溶液,风干后,再在原处滴上一滴%的茚三***乙醇溶液在微火旁烘干显色,察看紫红色斑点的出现。(三)黄色反响::含有苯环构造的氨基酸,如酪氨酸和色氨酸遇***后,可被硝化成黄色物质,该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠。反响式以下:多半蛋白质分子含有带苯环的氨基酸,所以有黄色反响,苯丙氨酸不易硝化,需加入少许浓硫酸才有黄色反响。:(1)鸡蛋清溶液100毫升将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1:20混匀,而后用六层纱布过滤。(2)大豆提取液100毫升将大豆浸泡充足吸胀后研磨成浆状用纱布过滤。(3)头发(4)指甲(5)%苯酚溶液50毫升(6)浓***200毫升(7)%色氨酸溶液10毫升(8)%酪氨酸溶液10毫升(9)10%:向7个试管中分别按下表加入试剂,察看各管出现的现象,有的试管反响慢可略搁置或用微火加热。待各管出现黄色后,于室温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性,察看颜色变化。:..():在浓硫酸存在下,色氨酸与乙醛酸反响生成紫色物质,反响机理尚不清楚,可能是一分子乙醛酸与两分子色氨酸脱水缩合形成与靛蓝相像的物质。含有色氨酸的蛋白质也有此反响。:(1)蛋白质溶液100毫升鸡蛋清:水=1:20(2)%色氨酸溶液10毫升(3)冰醋酸200毫升(4)浓硫酸(剖析纯):取3支试管。编号。分别按上表加入蛋白质溶液、色氨酸溶液和水,而后各加入冰醋酸2毫升。混匀后倾斜试一试管,沿管壁分别慢慢加入浓硫酸约I毫升,静置。察看各管液面间紫色环的出现。若不显然,可于水浴中微热实验(二)蛋白质的积淀反响一、蛋白质等电点的测定::(1)认识蛋白质的***解离性质。:..(2):蛋白质是***电解质。在蛋白质溶液中存在以下均衡:蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的pH达到必定数值时,蛋白质颗粒上正负电荷的多日相等,在电场中,蛋白质既不向阴极挪动,也不朝阳极挪动,此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。不一样蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时,蛋白质的理化性质都有变化,可利用此种性质的变化测定各样蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。本实验借察看在不一样pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。用醋酸与酷酸钠(醋酸钠混淆在酪蛋白溶液中)配制成各样不一样pH值的缓冲液。向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后,积淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。:(1)水浴锅。(2)温度计。(3)200毫升锥形瓶。(4)100毫升容量瓶。(5)吸管。(6)试管。(7)试管架。(8)乳钵。:(1)%,加少许水在乳钵中认真地研6,将所得的蛋白质悬波移入200毫升锥形瓶内,用少许40~50℃的温水清洗乳钵,将清洗液也移入锥形瓶内。加入10毫升1当量/升醋酸钠溶液。把锥形瓶放到50℃水浴中,并当心地旋转锥形瓶,直到酪蛋白完整溶解为止。将锥形瓶内的溶液所有移至100毫升容量瓶内,加水至刻度,塞紧玻塞,混匀。(2)当量/升醋酸溶液100毫升(3)当量/升醋酸溶液100毫升(4)当量/:(1)取相同规格的试营4支,按下表颠序分别精准地加入各试剂,而后混匀。:..生物化学实验报告(2)向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1毫升,加一管,摇句一管。此时1、2、3、4管的pH值挨次为、、、。察看其浑浊度。静置10分钟后,再察看其浑浊度。最浑浊的一管的pH即为酪蛋白的等电点。二、蛋白厦的积淀及变性::(1)加深对蛋白质胶体溶液稳固要素的认识。(2)认识积淀蛋白质的几种方法及其适意图义。(3)认识蛋白质变性与积淀的关系。:在水溶液中的蛋白质分子因为表面生成水化层和双电层而成为稳固的亲水胶体颗粒,在必定的理化要素影响下,蛋白质颖拉可因失掉电荷和脱水而积淀。蛋白质的积淀反响可分为两类。(1)可逆的积淀反响:此时蛋白质分子的构造还没有发生显着变化,除掉惹起积淀的要素后,蛋白质的积淀还能溶解于本来的溶剂中,并保持其天然性质而不变性。如大部分蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇(或***)短时间作用于蛋白质。提纯蛋白质时,常利用此类反响。(2)不行逆积淀反响:此时蛋白质分子内部构造发生重要改变,蛋白质常变性而积淀,不再溶于本来溶剂中。加热惹起的蛋白质积淀与凝结,蛋白质与重金届离子或某些有机酸的反响都属于此类。蛋白质变性后,有时因为保持溶液稳固的条件仍旧存在(如电荷),其实不析出。所以变性蛋白质其实不必定部表现为积淀,而积淀的蛋白质也未必都已变性。:(1)蛋白质溶液500毫升5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清的水溶液(新鲜鸡蛋清:水=1:9)(2)醋酸—醋酸钠的缓冲溶液100毫升(3)3%***银溶液10毫升(4)5%三***乙酸溶液50毫升(5)95%乙醇250毫升(6)饱和硫酸铵溶液250毫升(7)硫酸铵结晶粉末1000克(8)当量/升盐酸溶液300毫升(9)当量/升氢氧化钠溶液100毫升(10)当量/升碳酸钠溶液100毫升16/17:..生物化学实验报告(11)当量/升醋酸溶液100毫升(12)***红溶液20毫升(13)2%***:(1)蛋白质的盐析。无机盐(硫酸铵、硫酸钠、***化钠等)浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不一样,析出的蛋白质也不一样。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出,而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获取的蛋白质积淀,当降低其盐类浓度时,又能再溶解,故蛋白质的盐析作用是可逆过程。加5%卵清蛋白溶液5毫升于试管中,再加等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静置数分钟则析出球蛋白的积淀。倒出少许混蚀积淀,加少许水,能否溶解,为何将管内容物过滤,向滤液中增添硫酸铵粉末到不再溶解为止,l此时析出的积淀为清蛋白。拿出部分清蛋白,加少许蒸馏水,察看积淀的再溶解。(2)重金属离子积淀蛋白质重金属离子与蛋白质联合成不溶于水的复合物。取一支试管,加入蛋白质溶液2毫升,再加3%***银溶液1~2滴,振荡试管,有积淀产生。搁置片晌,倾出上消液,向积淀中加入少许的水,积淀能否溶解为何(3)某些有机酸积淀蛋白质取一支试管,加入蛋白质溶液2毫升,再加入1毫升5%三***乙酸溶液,振荡试管,察看积淀的生成。搁置片晌,倾出上清液,向积淀中加入少许水,察看积淀能否溶解。(4)有机溶剂积淀蛋白质取一支试管,加入2毫升蛋白质溶液,再加入2毫升95%乙醇。混匀,察看积淀的生成。(5)乙醇惹起的变性与积淀取3支试管,编号。依下表次序加入试剂:振摇混匀后,察看各管有何变化。搁置片晌,向各管内加水8毫升,而后在第2、3号管中各加一滴***。察看各管颜色的变化和积淀的生成。每管再加当量/升盐酸溶液数滴,察看积淀的再溶解。解说各管发生的所有现象。思虑题:1、经过本实验课你掌握了几种判定蛋白质和氨基酸的方法这些方法的原理是什么2、什么叫蛋白质的等电点3、举例说明蛋白质积淀与变性的关系。17/17