文档介绍：人神经生长因子(NGF)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂盒仅供研究使用
检测范围: pg/ml - 50 pg/ml
最低检测限: pg/ml
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的人NGF,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中NGF含量。
说明
:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
,稀释时可在水浴中加温助溶。
、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
概述
神经营养因子(neurotrophin, NT)是一类由神经所支配的组织(如肌肉)和星形胶质细胞产生的且为神经元生长与存活所必需的蛋白质分子。神经营养因子通常在神经末梢以受体介导式入胞的方式进入神经末梢,再经逆向轴浆运输抵达胞体,促进胞体合成有关的蛋白质,从而发挥其支持神经元生长、发育和功能完整性的作用。近年来,也发现有些 NT 由神经元产生,经顺向轴浆运输到达神经末梢,对突触后神经元的形态和功能完整性起支持作用。神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是人类发现的第一个神经营养因子,是多功能多肽生长因子。NGF 广泛存在于人和多种动物体内。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗NGF抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗NGF抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的NGF呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
需要而未提供的试剂和器材
标准规格酶标仪
高速离心机
电热恒温培养箱
干净的试管和Eppendof管
系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存
血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
血浆:可用EDTA或肝素