文档介绍：(一)基本概念:克隆(Clone)指的是通过无性繁殖过程所产生的与亲代完全相同的子代群体。分子克隆(MolecularCloning)是在体外对DNA分子按照既定的目的和方案进行人工重组,将重组分子导入到合适的受体细胞中,使其在细胞中扩增和繁殖,以获得DNA分子大量复制,并使受体细胞获得新得遗传特征的过程。载体DNA(vector)目的DNA(targetfragment)重组DNA(binantDNA)宿主(host)筛选、扩增克隆(clone)分子克隆的路线DNA重组转化分—获取目的基因和载体接—目的基因与载体的连接筛—重组DNA的筛选与鉴定转—,产生相同粘性末端,再通过DNA连接酶作用将两者连接起来,构成重组DNA分子有些限制酶只能将目的基因和载体DNA切割成平端,此时在T4DNA连接酶的作用下同样能连起来。合成连接子→与DNA平头末端连接→限制酶切割,产生粘性末端→连接,构建重组DNA。要求DNA分子内部必须完整,即两个DNA链间不存在缺口;否则末端脱氧核苷酸转移酶也会在3’-OH上加入多聚尾巴,破坏了DNA分子活性转化:以质粒作载体构建的重组体导入受体细胞的过程转染:以病毒作载体构建的重组体导入受体细胞的过程转导:以噬菌体作载体构建的重组体导入受体细胞的过程类型平板筛选(插入失活、蓝白筛选):(1).使核酸降解的核酸酶类:核酸内切酶、核酸外切酶。(2).催化核酸合成的酶类:DNA聚合酶,RNA聚合酶,连接酶,逆转录酶。(3).核酸修饰酶类;***化酶,激酶,基团转移酶,磷酸酶等。