分子克隆70540.pdf

文档介绍：/
周周俊俊宜宜
基因载体是一类能自我复制的基因载体是一类能自我复制的DNADNA分子,其中分子,其中
的一段的一段DNADNA被切除而不影响其复制,可用以置换或被切除而不影响其复制,可用以置换或
插入外源插入外源((目的目的)) DNADNA而将目的而将目的DNADNA带入宿主细胞。带入宿主细胞。
常用的载体有质粒、噬菌体、病毒常用的载体有质粒、噬菌体、病毒
基因工程的表达体系基因工程的表达体系
操纵子理论在基因工程中的应用操纵子理论在基因工程中的应用
目的基因翻译表达及其准确性目的基因翻译表达及其准确性
常用基因载体常用基因载体
原核生物表达体系:原核生物表达体系:
大肠杆菌大肠杆菌、、枯草杆菌、农杆菌枯草杆菌、农杆菌
大肠杆菌表达体系的优点:大肠杆菌表达体系的优点:
(1)(1)积累了充足经验,有数不清的载体可供应用;积累了充足经验,有数不清的载体可供应用;
(2)(2)对其研究充分对其研究充分,,可依载体选择不同菌种作宿主;可依载体选择不同菌种作宿主;
(3)(3)操作安全,致病能力低操作安全,致病能力低;;

(4)(4)成本相对低得多成本相对低得多。。
缺点:缺点:
(1)(1)原核生物与真核生物有不同的酶系统和基因调控方式原核生物与真核生物有不同的酶系统和基因调控方式
(2)(2)没有加工所需的酶系统没有加工所需的酶系统
(3)(3)糖基化问题糖基化问题
(4)(4)热源、内***不易除去热源、内***不易除去
(5)(5)常会形成包涵体常会形成包涵体
表达体系的发展表达体系的发展
表达体表达体载体载体宿主宿主
第一代原核生物表达体系质粒、噬菌体细菌
第二代酵母表达体系穿梭质粒酵母
第三代哺乳类细胞表达体系病毒、脂质体培养细胞
第四代基因直接导入 DNA 本身生殖细胞、
体细胞、个体