文档介绍：:..萍乡地区RhD阴性人群基因多态性分析Rh血型系统是红细胞血型系统中最为复杂的血型系统之一,具有复杂的遗传多态性,其临床意义仅此于ABO血型系统。Rh血型系统目前已发现49种抗原,以C、e、D、E^e这5种抗原在临床上最为重耍,尤其是D抗原,它是除ABO血型系统外最强的红细胞抗原,具有极强的免疫原性,是造成迟发性溶血性输血反应最常见的原因[1]。因此,鉴定RhD抗原表型被列为临床输血检测常规项目[1]。编码Rh血型抗原为2个高度同源性的基因:RhD基因和RhCE基因。RhD编码D抗原,Ee抗原。近年来,有些研究发现一些血清学初筛阴性的个体经进一步检测,发现一部分人有D抗原的存在。因此,为了解萍乡地区Rh阴性人群基因多态性状态,经序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法进行基因学检测,比较血清学结果与基因学结果的异同。〜2015年1月住院及门诊患者2035例标本进行了RhD抗原检测,%[2],对130例RhD阴性标本进行了检测,其中男性60例,女70例,年龄20〜75岁。,Thermo离心机。Alphaimager凝胶成像系统,TanonEPS300电泳仪,紫外分光光度计,日木富士DNA提取试剂盒,天津秀鹏生物技术有限公司的RhD基因检测试剂盒,江阴力博医药牛物技术有限公司的RhD血型定型试剂。,配成5%红细胞悬液,取1滴加入试管中,再向试管中加入2滴IgG的抗D试剂,37°C孵育30mino然后用生理盐水反复洗涤3次,弃上清液,再加入广谱抗人球蛋白试剂,1000r/min离心lmin,观察结果。有凝集者为RhD阳性,无凝集者为RhD阴性。,严格按说明书操作,紫外分光光度计检测OD26010D280,以确定DNA浓度及纯度,将提収好的DNA置于-20°C冻存备用。-SSP采用天津秀鹏生物技术有限公司的RhD基因检测试剂盒,扩增参数为96°C2min,1个循环;96°C20s68°C1min,5个循环;96°C20s65°C50s72°C45s,18个循环;72°C5min,1个循环;4°C保存。~%琼脂糖凝胶孔中,140〜150V电泳,10minJn于Alphaimager凝胶成像系统下观察结果。865bp为内参带,另一条为特异性扩增带,有特异性扩增带判断为阳性,无特异性扩增带判断阴性。2结果130例RhD阴性标本中,经PCR-SSP方法检测,10例1227DEL型,119例RhD-CE(2-9)-D型,1例弱D15型。-。由RhD基因和RhCE基因紧密串联排列组成。RhD基因和RhCE基因高度同源(%)均有10个外显子和9个内含子,长度分别为57932bp和58575bp,均编码41