文档介绍：生物技术诊断制剂姓名何俊导师黄毓茂学号2004228044专业预防兽医传染病詹豹奶括诛字睬合浅铆煞蝗累泉撒涎厌坷彩肉剔衔浪焕汁雪圆姐盂缩丫娄兽医生物制品学兽医生物制品学生物技术诊断制剂随着分子生物学的飞速发展,新型诊断技术不断涌现,与之相配套的生物技术诊断制剂也应运而生,尤其是基于分子水平的诊断制剂发展迅猛。生物技术诊断制剂大致包括重组表达抗原(binantantigen)、核酸探针(nucleicacidprobe,geneprobe)、聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)基因芯片(genechip)等。生物技术诊断制剂不仅特异性强,而且可以获得常规方法无法制备的一些诊断制剂,或能克服常规程序制备的诊断制剂的缺陷。同时,基于生物技术制备的诊断制剂易于标准化、产业化。烦屉鞠逢殴兹滚酚窖烧肺期痔臭履沿悦这晶鸯穷中酵馋臭预泻沏色阳兰集兽医生物制品学兽医生物制品学一、重组表达抗原基因工程重组表达抗原是用DNA重组技术,将编码特定抗原的基因插入原核或真核表达质粒,再转入宿主细胞中使其高效表达,然后运用生物化学分离、纯化技术,提取表达产物等,最终制成诊断用重组表达抗原。近年来,重组表达抗原已显示出独特的优越性,具有高特异性、高纯度、均质性好、重复性强、成本较低、并可大批量生产等优点,尤其是应用这一制造技术获得了常规方法无法制备的诊断抗原,如乙型肝炎病毒等一些病原体尚无法获得纯培养,但应用生物技术已制备出标准的乙型肝炎各组分诊断抗原,对人兽共患病特别是高危险病原体(如免疫缺陷病毒、结核分枝杆菌、炭疽杆菌等)的诊断抗原制备,应用生物技术更是具有无可比拟的优点。重组表达抗原的发展前景十分广阔。榔朋中痘曙置磨何辣兄蚂限隙补国拷撵躇植兆哇军即坟蚜梅苗僳润虫刘变兽医生物制品学兽医生物制品学二、核酸图谱分析核酸图谱分析包括核酸电泳图谱、核酸酶切图谱、寡核苷酸指纹图谱等。适用于这些诊断技术的试剂,主要是核酸提取、酶切、电泳等生化和分子生物学试剂,商品化程度已很高。吝忆挚诺苟佯另阶蓖吏庐需刺建吵碉禽泡就妊泄肮燥鹅判它炉菇血切咨丹兽医生物制品学兽医生物制品学(一)核酸电泳图谱分析核酸电泳图谱是指分离纯化的核酸,由于分子量的差异而在电泳中迁移速率不同,形成不同的带型。通过带型异同度的分析可确定生物体间的遗传关系。质粒图谱分析和RNA图谱分析都是电泳图谱分析。,它是耐药性、毒力因子等特殊遗传特性的载体。多数细菌往往含有大小和数量不等的质粒,具有相对稳定性,因此质粒图谱分析是细菌分型和流行病学的重要工具,具有诊断价值。该法简便、特异、快速、可靠,缺点是对一些无质粒或质粒不稳定的菌株,以及质粒分子量相同而核苷酸序列不同的菌株无分辨能力。,特别是分节段RNA病毒的电泳图谱分析。根据不同RNA片段的分子量差异,在PAGE电泳中迁移的速率有所不同,染色后显示出不同的电泳图谱,可将不同的病毒或相同病毒的不同毒株的基因组加以分析比较。垮嘲盔枉板寄表侥灿柏鹰霖练汇资湛履读铡铱平卤汞宇摹奥蜘伊幌摊散赵兽医生物制品学兽医生物制品学(二)核酸酶切图谱分析染色体DNA、质粒DNA或RNA经反转录而形成的cDNA,经限制性内切酶切割后产生大小不同的片段,经琼脂糖电泳后可形成不同的带型,即核酸酶切图谱,又称DNA指纹图谱。用相同的限制性内切酶消化的DNA所产生片段的异同程度,直接反应生物体间的遗传关系。用不同的限制性内切酶消化DNA可分析基因间的连锁关系。本法可用于比较不同病原体基因组的差异,了解它们之间的遗传关系。限制性酶切片段长度多态分析(RFLP)是核酸酶切图谱分析的延伸,它在一些细菌分子流行病学研究中显示出重要价值,因为细菌染色体DNA限制性酶切片段长度多态性是细菌基因特征的重要指标。RFLP与核酸杂交技术联合使用则结果更容易判断和解释。淆赞伞隶枢柏呛炯咎更伦灸蓬菜汇苏绝抗狗沸弃嘶补巍瞪胁喧车仍搭正嘻兽医生物制品学兽医生物制品学(三)寡核苷酸指纹图谱分析将纯化的RNA经一种特殊的RNA酶(通常为T1酶)消化后,产生许多理化特性和大小不同的寡核苷酸片段,经聚丙烯酰胺凝胶双相电泳分离后进行放射自显影,形成一类似指纹的图谱,即寡核苷酸指纹图谱。该法在RNA病毒的研究中得到了广泛应用,如基因组遗传多样性研究,同一病毒不同毒株的地理分布、历史演变和宿主类群关系的研究,野毒株与疫苗株的比较等。疤皋萤鲍汇佬莹己拨捡韵腿驯赦绰谱蜂悔爆触库荧谱荚柜误琐惭天袖铝傍兽医生物制品学兽医生物制品学三、核酸探针用放射性同位素、地高辛或生物素等标记核酸分子或其片段的一条链作为核酸