文档介绍：扬州大学
硕士学位论文
“睡美人”转座子介导外源基因在鸡输卵管和睾丸整合表达特
性研究
姓名:周智慧
申请学位级别:硕士
专业:动物营养与饲料科学
指导教师:岑宁;高波
20100501
“睡美人’’转座子介导外源基因在鸡输卵管和睾丸整合表达特性研究摘要导师:岑宁副教授物,用高保真ù影桌春郊蜃镈中分别扩增出长度各为的卵清和骺厍寺∪ü齅和,然后用限制性内切酶将蚈表达盒从上述两个载体中切出,克隆至转座子载体疕亩嗫寺∥坏悖佣菇ǔ杀泶顴蚳的整合型鸡输卵管特异表达载体疕甇和疕甇。为了证明构建的整合型载体能有效驱动目的基因在鸡输卵管上皮细胞中包裹后,注射至产蛋鸡输卵管膨大部,然后将载体注射鸡扑杀,在不同时间段取输卵管注射部位,分别用和组织冰冻切片检测报告基因的表达,结果显示基因在输卵管注射部位获得有效表达,且注射后泶锼饺越细摺研究生:周智慧高波讲师专业:动物营养与饲料科学为了构建“睡美人”转座子,闲图κ渎管特异表达载体,根据已经发表的鸡卵清蛋白基因缓’.调控区序列设计两对引蛋白基因’.调控区,将扩增产物克隆入甌载体,部分序列测定结果证明与国外发表的鸡卵清蛋白基因相应区域同源性为ァ=ḿβ亚宓鞍谆’.卵管特异表达载体命名为7直鸾躺ü獾鞍ǜ婊蚝腿巳樘坏憧寺∪雙载体,获得重组载体整合表达,将疕甇与转座酶按比例混和,经多聚阳离子周智慧“睡美人”转座子介导外源基因在鸡输卵管和睾丸整合表达特性研究三镏荽笱Ф锟蒲в爰际跹г海江苏扬州
提取输卵管注射部位基因组肞和点杂交检测报告基因的整合,结果显示基因获得有效转座整合。为了检测的表达性能,用上述方法将疕甇注射至产蛋鸡输卵管膨大部,在不同时间段取输卵管注射部位,和免疫组织化学检测结果表明,蛟谑渎压芘虼蟛炕竦谜纷录和翻译,表达产物能够与タ寺】固宸⑸乖固宸从ΑU庑┦匝榻峁明,本研究构建的整合型输卵管特异表达载体不仅能有效驱动目的基因在产蛋鸡输卵管上皮细胞中表达,而且能够促进转基因与受体染色体的整合,可以用于转为了进一步研究转座子能否有效介导目的基因在鸡精原干细胞中发生转座整合,本研究又构建了整合型组织特异表达载体,,克隆至转座子载体疕亩嗫寺∥坏悖菇ǔ杀泶顴ǜ婊虻恼显靥疕瓹H缓蠼玴/.隨W赴幢壤旌停嗑阳离子螅ü和柰⑸渲脸赡旯ḿη腹苣冢缓笤诓煌奔段取睾丸注射部位,分别用冰冻切片、免疫组织化学和等方法检测报告有较高表达水平。提取睾丸注射部位基因组直鹩肞和点杂交检测报告基因的整合,结果显示基因在注射后不同阶段均可获得转座整合。这些试验结果表明,本研究将整合技术和睾丸网注射法进行睾丸内精原干细胞转染技术相结合,可以实现外源基因的有效整合和稳定表达,为建立转座子介导法制作转基因鸡奠定了坚实的基础。基因鸡输卵管生物反应器的研制。基因的表达。结果显示基因在曲精细管获得稳定表达,注射后匀痪关键词:鸡;睡美人转座子;体内转染;整合表达扬州大学硕士学位论文一
“睡美人”转座予介导外源基因在鸡输卵管和睾丸整合表达特性研究疦瑃:.瑃.,,.疕疕疕!.琭疕狾猟’瓵
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膨蛑,周孵缝,彦阄镪餐,切辍辉挛签字日期:如细年掠∪汐扬州大学学位论文原创性声明和版权使用授权书本人声明:所呈交的学位论文是在导师指导下独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含其他个人或集体已经发表的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:学位论文版权使用授权书本人完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子文档,允许论文被查阅和借阅。本人授权扬州大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。学位论文原创性声明签字日期:名期签日师字导扬州大学硕士学位论文:
第一篇文献综述第一章“睡美人研究现状弟一扁又献练还,W一、转座系统的结构转座子又称可移动基因,跳跃基因,是一种可在基因组内插入和切离并能改变自身位置的蛄小T缭兰甏紫菶瓹谟衩字蟹⑾帧緇】,以后又陆续在细菌、真菌及动植物中都有发现,如细菌中的湍钢械腡约脊椎动物基因组中也存在着大量的转座子,主要分为两类:一类是具有类似反转录病毒结构的妥W樱捎谩案粗普程机制,首先将B嘉猂,在反转录酶的作用下合成醋B嫉腄插入染色体的其他部位,结果在染色体上的位置发生了移动。另一类是型转座子,主要采用“剪切