文档介绍：ICS点击此处添加中国标准文献分类号SN出 行中华人民共和国 入境检验检疫 业标准SN/T XXXXX—XXXX油菜茎基溃疡病菌检疫鉴定方法Detection and Identification of Leptosphaeria maculans (Desm)Ces. & de Not. of colza点击此处添加与国际标准一致性程度的标识(征求意见稿)XXXX - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布SN/T XXXXX—XXXX前 -2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准主要起草单位:中华人民共和国湖北出入境检验检疫局,中国检验检疫科学研究院,上海出入境检验检疫局,江苏出入境检验检疫局,华中农业大学等本标准主要起草人:赵晖,王振华,易建平,吴翠萍,周国梁,曾宪东,李彬,吴品珊,李国庆。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。ISN/T XXXXX—XXXX油菜茎基溃疡病菌检疫鉴定方法1 范围本标准规定了油菜茎基溃疡病菌的检疫鉴定方法。本标准适用于油菜繁殖用种子和油用种子、种苗、植株等油菜茎基溃疡病菌的检疫鉴定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3  分类地位油菜茎基溃疡病菌 (Leptosphaeria maculans (Desm) Ces. & de Not.),属真菌界(Fungi),子囊菌门(ycota),座囊菌纲(Dothideomycetes),格孢腔菌目(Pleosporales),格孢腔菌科(Pleosporaceae),小球腔菌属(Leptosphaeria),无性态为Phoma lingam。该病菌在世界上的分布参见附录A该病菌的寄主广泛,主要有芸苔属植物,如油菜、甘蓝、花椰菜等十字花科作物。可造成油菜茎基及根系腐朽,易于折断而死亡。 鉴定原理根据油菜茎基溃疡病菌在培养基上生长的菌落、菌丝、分生孢子和分生孢子器形态,以及其在寄主上的为害症状、形态学特征和PCR特异扩增片段作为鉴定依据。4  仪器设备生物显微镜、体视显微镜、高速冷冻离心机、纯水仪、高压灭菌器、PCR 仪、凝胶成像系统、电泳系统、实时荧光 PCR 仪、培养箱、低温冰箱。 用具可调微量加样器(2 μL、10 μL、20 μL、100 μL、200 μL、1000 μL)及其枪头、网筛(  mm)、研钵、吸水纸、培养皿、试管、、研钵、离心管( mL、 mL)、PCR管( μL)、量筒、烧杯等。5 试剂和培养基1SN/T XXXXX—XXXX除另有规定外,所有试剂均为分析纯或生化试剂,实验用水符合GB/T 6682。  1%次***酸钠。  DNA提取试剂:DNA提取试剂盒,异丙醇,无水乙醇。  PCR试剂:PCR Buffer (含Tris-HCl,MgCl2),Taq酶,d