文档介绍：口蹄疫病毒L咿和3C印调控宿主抗病毒天然免疫反应的分子机制研究摘要天然免疫不仅是机体抵抗病原体(包括病毒、细菌等)侵袭的第一道防线,而且是激活获得性免疫的基础。作为一种重要的抗病毒因子,干扰素在天然免疫研究领域具有十分重要的地位。而在进化过程中,很多病毒具有了逃逸或抑制干扰素的能力。深入研究病毒如何调控干扰素产生是当前病毒学和免疫学研究热点。目前,对人和小鼠天然免疫系统已经研究的比较清楚,而对猪天然免疫系统的了解还知之甚少。主要体现在大量的猪源天然免疫信号分子和效应分子没有被克隆和鉴定,以及效应分子启动子荧光素酶报告系统等高通量检测信号通路的工具缺乏,这在一定程度上阻碍了病毒与猪天然免疫系统相互作用的深入研究。鉴于此, 本课题以猪天然免疫信号通路为切入点,克隆了16个重要的猪天然免疫信号通路相关分子,并构建了猪天然免疫信号通路效应分子启动子荧光素酶报告系统,初步建立了研究猪天然免疫信号通路的技术平台。在此基础上,进一步系统分析了口蹄疫病毒非结构蛋白Lpm和3Cpfo抑制干扰素产生的作用机制和分子细节。具体内容如下:Ⅱ’, 基因启动子区域后,,(。Luc) (4×)。,在poly(I:C)或poly(dA:dT)的刺激下,荧光素酶的表达显著增加,说明荧光素酶报告载体构建正确。本研究为进一步开展猪 D干扰素信号转导通路的研究奠定了基础。 (regulated upon activatio巩nomal T—cellsexpressed a11dsecreted,毗蝌TES)是一种重要的趋化因子,在炎症以及免疫反应中发挥着重要作用。通过对本实验室克隆获得的猪凡蝌,IES基因启动子区域的分析,确定了其特征性激活转录元件的结合位点,并构建了包含启动子的一系列 5’端缺失突变体的荧光素酶报告质粒,转染细胞发现猪R州TES基因启动子-220/“6的266bp核苷酸区域可以满足其在PK-15细胞中的基础转录活性。进一步研究发现,poly(I:C)或poly(dA:dT)能显著诱导猪凡气NTES启动子活性以及mIⅢA 水平的表达,且呈时间和剂量依赖性。启动子缺失和突变实验发现,干扰素刺激应答元件对poly(I:C)或poly(dA:dT)诱导凡埘TES转录是必需的。此外,(I:C)或poly(dA:dT)诱导黜蝌TES途径中也发挥了重要作用。华中农业大学20ll届博士学位论文 ()等天然免疫信号通路基因的克隆Ⅺ,D干扰素启动子刺激物 l( promoter Stimulator1,)(也称为MAVSⅣIS~Cardif)作为对G-l/MDA5 的重要接头分子参与诱导I型干扰素的产生。本研究运用ImPCR和RACE-,序列分析发现,,编码524个氨基酸;其编码蛋白N端为C√6dm区,中间是脯氨酸富集区,C端为跨膜区。该蛋白与小鼠、大鼠、猴、人和牛Ⅺ%。, ,且其C端的跨膜结构域对其线粒体定位是必需的。(B,。 。此外,(I:C),。。,本研究还相继克隆得到Ⅺ、MDA5、TRAF6等15个猪天然免疫信号通路中的重要分子。这为今后研究猪天然免疫奠定基础,同时也为研究猪病原与宿主相互作用提供便利工具。 Lpm通过下调干扰素调节因子3,7的表达抑制dsRNA诱导的I型干扰素的转录已有研究证实口蹄疫病毒前导蛋白(FMDV Lp∞