文档介绍：Origami B (DE3)大肠杆菌菌株
编号
名称
北京华越洋生物NRR00890
Origami B (DE3)大肠杆菌菌株
基本信息：
名称：Origami B (DE3)大肠杆菌菌株规格：300ul甘油菌
储存温度:-80°C
基因组：
F-ompT hsdSB(rB- mB-) gal dem lacYl ahpC (DE3) gor522:: TnlO trxB
(KanR, TetR) 简介：
Origami B (DE3)属于大肠杆菌克隆型菌种，Origami B系列菌株同样具有Origami亲列齒株含有的trxB/gor基因突变，但是该菌株是来源于 BL21的lacZY基因突变株。所以，Origami B系列菌株是集合BL21, Tuner 和Origami三种菌株的优点于一身。在thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase (goF)基因上同时含有突变，这使得该菌株矗够更加高效的在细胞质内生成二硫键，有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。
TrxB和Gor基因突变使得质粒能够分别具有卡那和四环素抗性，所以本菌株无法用于卡那和四环素抗性质粒的蛋白表达。DE3是溶源性的入DE3,所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于 pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。
Origami B(DE3)菌株可使用LB培养基在379有氧的条件下进行培养, Origami B(DE3)的感受态细胞可以在42。£：下热激处理转化质粒。使用IPTG 可以诱导目的基因高效表达。
操作说明：
本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面滩取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。
为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
冷冻管开封：
用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌株复溶：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸収lml左右复溶液，加入到冷冻管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培养。细菌在30-35°C培养箱中培养24-48h,真菌在23-28°C培养箱中培养24-72h (必耍时，可适当延长培养时间)。
菌株传代：
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽星增大接种