试验二细菌的染色和细菌细胞构造的观察.ppt

文档介绍：试验二细菌的染色和细菌细胞构造的观察
实验一
细菌的形态和构造观察
2021/1/12
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一、实验目的
观察细菌的菌落特征
掌握简单染色法和细菌涂片方法
在油镜下观察细菌个体的形态特征
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1. 结合油镜的使用，观察三张细菌染色片〔球状菌、杆状菌、和螺旋状菌〕，边观察边绘图。
2. 看示范镜：观察双球菌、四联球菌，并绘图。
四、实验步骤
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思 考 题
油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？
使用油镜时，为什么必须用镜头油？
镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？
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实验二
细菌的革兰氏染色
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一、实验目的
掌握细菌的革兰氏染色
进一步纯熟掌握显微镜油镜的使用技术
观察和识别细菌细胞的特殊构造
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细菌细胞壁的构造和组成存在差异，因此不同细菌对革兰氏染色有不同的反响〔阳性和阴性〕：
革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多脂类，肽聚糖层较薄、交联度低，当以95%酒精脱色时，脂类被溶解除去，使得细胞壁空隙变大，肽聚糖因95%酒精处理，其孔径会缩小，但由于肽聚糖含量较少，细胞壁孔径缩小有限，使得结晶紫与碘形成的紫色染料复合物被95%酒精洗脱出细胞壁之外，并被随后的红色复染剂染成红色；
革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，脂类含量少，经95%酒精脱色处理后，肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，使得结晶紫与碘形成的紫色染料复合物很难被95%酒精洗脱出细胞壁之外，因此细菌仍保存初染时的颜色，呈现紫色。
二、实验的根本原理
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显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，香柏油，二甲苯，双层瓶，擦镜纸，生理盐水，吸水纸，染色缸等。
染色剂：草酸铵结晶紫染色液，卢〔路〕哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，%番红染色液。
菌种：哈氏弧菌和鳗弧菌24h普通海水琼脂斜面28℃培养物，金黄色葡萄球菌和芽孢杆菌24h牛肉膏琼脂斜面28℃培养物。
三、实验材料
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革兰氏〔Gram〕染色法 1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进展脱色约30秒，后立即用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染1分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。
四、实验步骤
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思　考　题
要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？关键在哪几步？为什么？
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实验三
实验室环境及人体外表的
微生物检查
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认识细菌分布的广泛性；
掌握对菌落识别；
懂得无菌操作的重要性。
一、实验目的
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每一菌体在适宜条件下，经过屡次细胞分裂可形成一个肉眼可见的子细胞集合体，称为菌落。
由于不同细菌其个体的形态、构造、生理和生化等特征不同，当一个菌体经分裂繁殖形成菌落后，就使得菌落呈现其固有的特点。
通过适宜的方法，将自然环境中的微生物接种到平板培养基上，经过培养后观察平板上的菌落，就可以检查环境中及人体细菌的数量和类型。
二、实验的根本原理
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无菌试管，无菌吸管，无菌空培养皿，细菌计数器，蜡笔，玻片，消毒牙签，酒精灯，接种环，无菌棉拭子等。
琼脂平板培养基，高层琼脂培养基，无菌生理盐水，2％碘酒，75％乙醇，普通琼脂平板，血琼脂平板，革兰氏染色剂。
水样，泥土，空气和人体。
三、实验材料
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1、正常人体的细菌检查
皮肤细菌的检查
〔1〕将手指在平板上按一下；取一根头发，用无菌镊子贴放在平板上。
〔2〕平板培养、观察
四、实验步骤
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咽部细菌的检查
〔1〕用无菌棉拭子蘸取咽部分泌的液体，然后将该棉拭子在血