文档介绍：植物基因克隆实验规则
一、 植物基因克隆实验课的目标
根据基因克隆实验操作的整体性和连贯性特点，将该实验设计为综合性实验课程，实验 内容设计上完全抛弃了原来分散的、孤立的单纯学****某一实验技术的缺陷，将单个实验综合 为系统的、连贯的系列型分搅拌。
（NaOH固体颗粒）。
注意：，EDTA才能完全溶解。
加去离子水将溶液定容至100mL。
高温高压灭菌，~1%的8巯基乙醇，室温保存。
50XTAE电泳缓冲液1L （母液）：
242 g Tris， mL 冰醋酸，100 mL EDTA （）
荧光染色剂漠化乙啶（Ethidium bromide，EB）：
1gEB，100mLH2O，常温避光保存（终浓度10mg/mL，琼脂糖凝胶电泳配胶时加1滴即可）
琼脂糖凝胶配置（1%）：
，20mL TAE电泳缓冲液，加热溶解后待混合液温度降至手温时加一滴EB；
LB液（固）体培养基（1L）：
10g蛋白胨，5g酵母提取物，10gNaCl，固体培养基中加入15g琼脂粉，NaOH调PH=，高温高 压灭菌30分钟后，固体培养基中的抗生素于温度降至手温时加入，4 oC保存；
氨苄青霉素（Amp）：
Amp，10mLddH2O， um滤膜过滤灭菌；
***仿/异戊醇（24： 1）：
96mL***仿，4mL异戊醇（4oC条件下保存）；
3M乙酸纳（NaAc）：
，加水定容至100mL （）；
五【实验方法】
固体试剂的取用规则
1）要用干净的药勺取用。用过的药勺必须洗净和擦干后才能再使用，以免沾污试剂。
（2） 取用试剂后立即盖紧瓶盖。
（3） 称量固体试剂时，必须注意不要取多，取多的药品，不能倒回原瓶。
（4） 一般的固体试剂可以放在干净的纸或表面皿上称量。具有腐蚀性、强氧化性或易潮 解的固体试剂不能在纸上称量，应放在玻璃容器内称量。
液体试剂的取用规则
（1） 从滴瓶中取液体试剂时，要用滴瓶中的滴管，滴管绝不能伸入所用的容器中，以免 接触器壁而沾污药品。从试剂瓶中取少量液体试剂时，则需要专用滴管。装有药品 的滴管不得横置或滴管口向上斜放，以免液体滴入滴管的胶皮帽中。
（2） 从细口瓶中取出液体试剂时，用倾注法。先将瓶塞取下，反放在桌面上，手握住试 剂瓶上贴标签的一面，逐渐倾斜瓶子，让试剂沿着洁净的试管壁流入试管或沿着洁 净的玻璃棒注入烧杯中。取出所需量后，将试剂瓶扣在容器上靠一下，再逐渐竖起 瓶子，以免遗留在瓶口的液体滴流到瓶的外壁。
（3） 在试管里进行某些不需要准确体积的实验时，可以估计取出液体的量。例如用滴管 取用液体时，1cm相当于多少滴，5cm液体占一个试管容器的几分之几等。倒入试 管里的溶液的量，一般不超过其容积的1/3。
（4） 定量取用液体时，用量筒或移液管取。量筒用于量度一定体积的液体，可根据需要 选用不同量度的量筒。
六【注意事项】
配制的Tris-Hcl（）溶液如果呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。
，才能完全溶解。
实验二：植物总DNA的快速少量抽提和浓度测定
一【实验目的】
1、 学****和掌握从新鲜的叶片中提取植物总DNA的操作方法
2、 了解分光光度计检测DNA浓度的方法
二【实验原理】
CTAB法简易提取DNA方法简便、快速，DNA产量高（纯度稍次，适用于一般分子生 物学操作）。先用机械方法磨碎植物组织，使组织细胞破碎，然后加CTAB抽提液水浴提取 DNA，最后用冰乙醇沉淀DNA即可。
DNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm处。波长为260nm 时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。DNA的纯度可 以通过测定260nm，230nm和280nm的紫外吸收值来测定，纯的DNA OD260 / -, OD260 / 230 应大于 ，
三【试剂】
CTAB抽提液、***仿-异戊醇（24： 1）、无水乙醇、70%的乙醇、ddH2O
四【仪器设备及材料】
仪器设备：剪刀、金属浴、离心机、、移液枪、分光光度计
材料：新鲜的洋甘菊叶片
五【实验步骤】
65oC水浴预热提取液，研钵在使用前-80oC冷冻一段时间；
取2-3g植物叶片于研钵中，加入液氮后充分研磨至粉末状后快速转入10mL离心管中， 加入4mL预热提取液后上下颠倒震荡混匀，65oC水浴锅中温浴30分钟；
加入相同体积