文档介绍：石蜡切片法的一般流程为:取材→固定→抽气→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→粘片→染色→封片. (一)取材用锋利的刀片切取新鲜的植物材料,选定适宜的材料,立即固定. 取材的注意事项如下:(1) ,以免挤压损坏组织;取病理材料时,应设置对照材料.(2) 所取材料大小要适当:根和茎一般直径≤5mm, 切取成 5-10mm 小段;叶片一般取过中脉处,切成 2-5mm 宽,5-8mm ,必须注意刀片与中轴成直角,两切面平行,,雄蕊一般不需分割. (3) :在进行植物发育的研究过程时, 需要找到细胞分裂相,一般在晴天的早晨 9:00-10:00 时取材,此时植物细胞分裂活动较明显.(4) 取材不易过老,否则制片有难度(过老的材料须在滑走切片机上进行);对纵切的材料适当多取材,如根尖,茎尖等,因为切到材料正中的概率较低. (二)固定将已切好的材料尽快地浸入相当于材料 10-15 ,使细胞的新陈代谢瞬时停止,,增强内含物的折光度, 令细胞易于着色的目的,,性质,,保存于加盖的容器内,,应是穿透力强,使细胞立刻致死,原生质全部凝固;不发生任何变形,增强折光率,并且不妨碍染色. 常用固定液:. ⑴% 乙醇. ⑵ 4%-10%. ⑶,刺激性极强,低温下凝结成冰, :由几种试剂,:①优缺点互补;②膨胀与收缩相互平衡;③强氧化剂与还原剂应分别配置. 常用混合固定液有下列几种: ⑴FAA 固定液(福尔马林-冰醋酸-乙醇)广泛适用于根,茎,叶,花药,子房的组织切片, (10 ℃左右)适用于材料的长期保存,,不妨碍染色,但用于细胞学上的固定效果较差. ⑵纳瓦兴(Navaschjn's) 固定液 1912 ,不能长期保存;主要用于显示分裂相. (三)抽气植物材料内部多由于含有空气,,并排除材料内气泡的干扰. 一般抽气时间为 20-30 min. 抽过气的材料在停止抽气,应沉入底部. (四)洗涤固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀或结晶,影响观察;有的还会继续作用,,在使用材料时,需根据固定液的种类,用水,缓冲液或 70% :用FAA 固定的材料在脱水时用 70% ,可将材料自固定液中取出,放入指形管,加入半管水,用纱布将管口扎紧,置于水槽内, 12- 24h.