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文档介绍:尿液核苷酸三联体结合蛋白1的应用的制作方法
尿液核苷酸三联体结合蛋白1的应用的制作方法
本发明提供一种尿液核苷酸三联体结合蛋白1的应用,具体为尿液核苷酸三联体结合蛋白1在制备用于诊断或检测2型糖尿病的制剂中的应用。本发明通过研究证实与正] 为了 了解疾病进展,及时治疗并发症,2型糖尿病患者需要监测血糖控制情况。在 现有的临床检查中,采集末梢血或静脉血是作为血糖监测的最佳标本,但血液标本的获取 有创,乳糜血或溶血会影响血糖检测的准确性,并且频繁采血会对患者造成心理负担,尤其 是老年人和肥胖人群。因此,如果能建立一种对2型糖尿病患者进行筛查、监测的无创性检 查方法,对2型糖尿病的早期筛查、诊断、预防及治疗均具有极其重要的意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种尿液核苷酸三联体结合蛋白1 (Histidine triad nucleotide-binding proteinl,HINT1)在制备用于诊断或检测2型糖尿病的制剂中的应 用。
[0007] 优选地,所述尿液核苷酸三联体结合蛋白1的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示。
[0008] 优选地,所述制剂为2型糖尿病患者尿液核苷酸三联体结合蛋白1检测试剂盒。所 述试剂盒包括盒体以及设置在盒体内的酶标板和试剂。
[0009] 优选地,所述酶标板由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组 成,每个可拆装酶标反应微孔条有8个反应孔。
[0010] 优选地,每个反应孔预包被兔抗人HINT1多克隆抗体。
[0011] 优选地,所述试剂为HINT1标准品溶液、酶标二抗、抗体浓缩液、显色液A、显色液 B、终止液、浓缩洗涤液。
[0012] 优选地,所述试剂盒还包括盖板膜、放置试剂的下凹瓶位以及自封袋。
[0013] 优选地,所述下凹瓶位共13个,由塑料泡沫制成。
[0014] 优选地,所述酶标板由聚苯乙烯制成。
[0015] 发明人首先收集了无并发症及其他合并症的2型糖尿病患者和正常对照的随机 尿液标本,尚心后取上清,利用弱阳尚子交换磁珠纯化和分尚尿液标本。将1 μ 1标本与 1〇μ1基质(%的α-氰基-4-羟基肉桂酸,HCCA)混匀后,取Ιμ?点在Anchorchip (Autoflex MALDI TOF,Bruker-Dalton)祀板上,标本离子化后进行质谱分析,采集 1000-10000Da范围内的数据,获得由不同质荷比的蛋白峰构成的质谱多肽图。应用 ClinPr〇T〇〇ls2. 1分析软件对2型糖尿病组和正常对照组的所有质谱图进行分析,筛选 差异性多肽。然后发明人对具有统计学意义的差异性多肽进行基质辅助激光解
吸电离飞 行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)鉴定,在 International Protein Index (IPI human v3. 45fasta with71983entries)数据库检索得到2型糖尿病组与正常对照组间差异表达 的HINT1 (Histidine triad nucleotide-binding prote