文档介绍：浙江理工大学
硕士学位论文
家蚕BmL130基因的表达分析及组织定位研究
姓名:马俊
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:张耀洲
20090301
要摘浙江理工大学硕士学位论文我们从本实验室构建的家蚕蛹文库中筛选得到一条新的序列,经比对分析后确定其为一未知基因,命名为基因长为,预测该基因编码霭基酸残基,分子量大小为.,等电点为4覩等数据库中利用焖鳎⑾钟隑蛄型葱越细叩木R恍┘傧氲鞍祝这些蛋白功能未知。我们根据序列的蛏杓粕舷掠我铮琍扩增后经盖校迦肴诤媳泶镌靥錺南嘤γ盖形坏悖晒菇ㄖ刈槿合蛋白表达质粒并转化大肠杆菌惺芴赴璓、酶切鉴定以及测序分析证实重组氯贰盏己罅呀饩鱏治觯有一浓集特异性蛋白条带,重组蛋白以包涵体的形式表达,通过亲和层析纯化了重组蛋白,并使用该重组蛋自免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,测效价达。利用荧光定量蚖的方法,对在家蚕各时期和五龄幼虫各组织的转录和表达水平进行分析。实验结果表明:在家蚕不同发育时期,成虫期最高,其次为幼虫和蛹期,卵期则最低;在不同组织中,以睾丸中最高。蛋白在家蚕的睾丸中有表达,但在其他组织中没有检测到该蛋白的存在,推测其可能与家蚕的生殖发育有关。关键词:家蚕;基因;组织定位;荧光定量,开放阅读框大小为处
甌.,甒,籅;浙江理工大学硕士学位论文..,,.甤⑺簍狿⑽鰐猚..築;
—牛血清蛋白乙二胺四乙酸卡那霉素一籶騮
我日期:旯ㄏ浙江理工大学学位论文原创性声明浙江理工大学硕士学位论文本人郑重声明:我恪守学术道德,崇尚严谨学风。所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究上作所取得的成果。除文中已明确注明和引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写,我对所写的内容负责,并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:
≯::。弘旯宕日不保密口/浙江理工大学学位论文版权使用授权书浙江理工大学硕士学位论文学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅或借阅。本人授权浙江理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于学位论文作者签名:保密口,在年解密后使用本版权书。指导教师签名:日期:,
第一部分文献综述与实验设计浙江理工大学硕士学位论文
第一章文献综述浙江理工大学硕士学位论文也嫌爰也瞎δ芑蜃檠芯扛攀家蚕是重要的经济昆虫,同时也是昆虫遗传学研究的模式生物之一。家蚕为完全变态昆虫,其生活史包括卵、幼虫、蛹和成虫四个时期。家蚕单倍体由条染色体组成,雌性异配物种,家蚕的性别是由旧宓拇嬖谟敕窬龆的,为雌性,为雄性【俊P员鹁龆ㄊ俏镏纸≡竦慕峁抢コ嫔活动的基本特征,并影响其个体发育的各个方面,如胚胎发生、性别分化、生殖等生理活动过程年由中科院北京基因组研究所与西南农业大学等单位共同合作完成家蚕基因组框架图,并在又旧戏⒈砹颂馕!禔对染色体,约亿个碱基对,测序获得了万个完整基因,Ф喔龌因片段,进而推断家蚕具有蚨喔龌颍渲千左右的基因为新基因【。家蚕新基因的功能研究是家蚕功能基因组研究中的重要组成部分,通过对新基因的功能研究将有助于深入了解家蚕生长发育调节、免疫和抗性、性别决定以及从分子水平阐明家蚕丝蛋白质合成等重要生物性状的分子机理奠定重要的基础。目前未知功能基因的研究方法和技术有:利用生物信息学分析软件对基因进行功能学预测【;用.⒃辉咏弧和免疫组化同等方法从和蛋白质水平对基因进行表达谱分析;基因敲除技术、反义技术⒒蛐酒际鮨引、基因表达序列分析取也瞎δ芑蜃榈难芯糠椒甀生物信息学分析目前国际上常用的生物信息学数据库如:欧洲的分子生物学实验室,⒒蜃樾蛄惺菘,腿毡镜腄数据库旱鞍字市蛄惺菘馊纾旱鞍字市畔⒆试的论文,家蚕基因组具有,
浙江理工大学硕士学位论文蛋白质结构分类数据库、蛋白质模型数据库对基因序列资料中各类信息进行识别和比较,寻找序列之间的同源性,得到序进行比较分析,如果具有足够的相似性,则可用来推测未知序列的生物信息。因此我们可以从核酸以及氨基酸的层次上去分析。如用谙叻治鋈砑的核苷酸序列进行同源性比较,之后使用生物软件在线工具寻找开放阅读框,ü饣牛糜ü庑藕呕凼凳奔嗖