文档介绍：分子克隆 报告人:
克隆载体
PCR技术
DNA操作酶
DNA重组技术
C o n t e n t s
分子克隆
分子克隆(基因克隆、DNA重组技术)
通过体外重组技术,将一段目的DNA经切割、连接插入适当载体,并导入受体细胞,扩增形成大量子代分子的过程。分子克隆的核心是:体外重组即人工将一段目的DNA插入一个载体的过程
载体DNA
(vector)
目的DNA
(target fragment)
重组DNA
(binant DNA )
宿主(host)
筛选、扩增
克隆(clone)
分子克隆的路线
DNA 重组
转化
载体的特性
1
分子较小,可携带比较大的DN***段
载体的特性
能独立于染色体而进行自主复制并且是高效的复制
2
有时还要求载体要能启动外源基因进行转录及表达,并且尽可能是高效的表达
4
3
要有尽可能多种限制酶的切割位点,但每一种限制酶又要最少的切割位点
5
从安全角度考虑,要求载体不能随便转移,仅限于在某些实验室内特殊菌种内才可复制
有适合的标记,易于选择
6
1
2
3
4
质粒载体
噬菌体载体
酵母菌质粒载体
动植物病毒载体
克隆载体
质粒载体
质粒是一种独立于染色体外的小分子环状DNA,一般大小约为数千碱基对,可自身复制和表达,有的质粒还带有可做
为选择性标记的抗
药性基因,所以质
粒经过适当改选后
便可成为良好的载
体
噬菌体载体
一种典型的头-尾结构,双链线状DNA分子,全长50kb,含66个基因,在其分子两端各含有12个碱基的互补单链,是天然的粘性末端,被称为COS位点
λ噬菌体
一种典型的纤维状结构,其DNA分子相比λ噬菌体要小的多,长度仅6407个核苷酸,通常为环状双链DNA
M13噬菌体
λ噬菌体结构
它本身是一种核蛋白,核心是一段DNA,结构上有一个蛋白质外壳和尾巴,尾巴上的微丝可以把噬菌体的DNA注入细菌内
cos位点的作用
cos位点在λ噬菌体侵染周期中起着两种截然不同的作用
使已经注入细胞的线性DNA分子闭合成环,这是使噬菌体DNA分子插入细菌基因组的必要先决条件
当前噬菌体被从宿主细胞中切除后,此时其作为一个限制性内切核酸酶的识别序列