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生化物质分离的特殊性:
要求:分离方法简便,选择性好,效率高,保持生化物质的分子结构和构型,分离方法尽量不影响生化物质的生物活性。
由于生化物质一般都很脆弱,易受化学、物理因素影响而变性,因而分离过程常要求在低温、洁净、温和的条件下进行。
本章所提到的生物大分子主要是指蛋白质、酶及核酸。
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生化及临床分析样品的预处理。
生物样品的常规分离纯化方法,如透析、微过滤、冷冻干燥及离心技术;
生物大分子的电泳分离纯化技术;
生物大分子的色谱分离纯化技术;
本章主要的内容包括:
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生化分析样品的准备与预处理
生化样品极其复杂,首先应对所关心的待测物处于生物体的哪一个部位所获得原始的样品,并对实际分析之前应进行怎样的处理必须有所了解。
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样品的类型、采集及保存
样品的类型
生化及临床分析的样品对象非常广泛,分布于动物或人体的每一个部位。它们可以是内源性的化合物或外源性的化合物。样品的基质可以是简单的血样、尿样,也可以是比较复杂的粪便以至整个组织。这些基质非常复杂,常常由多相组成,如血浆和血细胞及多种分子量大小不同的化合物。被分析对象的稳定性也变化极大,有只能稳定存在几分钟、对蛋白酶极为敏感的肽类,也有几乎是完全稳定的药物的代谢物。
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样品的采集
对于给定的样品。采集处理速度与样品的代谢活性与它们的化学和生化稳定性密切相关。
尿液中各种样品的浓度一般认为可稳定几小时。组织样品一般需要快速冷冻以防止发生变化,采样者应该有相应的样品采集及保存的设备。
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1. 血样
成人平均含6L的血液、其中约55%的血浆和45%的细胞。血样的采集一般采取清晨空腹采血,以避免饮食、运动、情绪等对血液成分的影响。动物一般采取禁食12~16h后采血,一般生化检验所需的血液标本采取静脉抽血。
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血样有全血、血浆和血清之分。
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2.组织样品
组织样品通常采自肝、肌肉、肺、骨髓或肠。这类组织是代谢活性的,因此采样后几秒之内要在液氮中或其它冷却剂中冷冻。
液氮
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酶在天然界中总是存在于很复杂的混合物中,通常一种细胞中可能含有成百上千种酶,为了了解和分析一个复杂生理样品,如亚细胞器、细胞或整个组织中的酶,就必须将酶放在一个尽可能简单的体系中进行研究。通过对单一酶的研究可以获得酶对哪些底物具有特异性、反应的动力学参数及酶作用方式。所有这些数据对于研究酶在复杂体系中的功能是非常重要的。在许多医学及工业应用方面.是否具有纯的酶制剂非常关键。
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