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文档介绍：荧光定量PCR技术原理及应用
LM Su, 2015 Vazyme, China
主要内容
qPCR的原理
化学原理
数学原理
qPCR的实验流程及注意事项
qPCR的应用
--绝密--
qPCR的原理
什么是qPCR?
Real-time PCR ,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过Ct值和标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
qPCR 化学原理
荧光(染料、荧光基团)
SYBR
TaqMan
qPCR 化学原理
SYBR
一种DNA小沟非饱和性结合染料
与DNA结合时发光/不结合(游离)时不发光
每形成一条DNA双链,就会有一定数量的染料结合上去
染料一结合,就会产生荧光信号
信号强度与DNA分子总数目成正比(unless)
变性
退火
延伸
qPCR 化学原理
TaqMan Probe
一种水解探针(5’ Reporter, 3’ Quencher)
完整时不发光/水解后发光
每形成一条DNA链,就会水解一条探针
每水解一条探针,就会产生一个单位信号
信号强度与结合过探针的DNA分子总数目成正比(unless)
N = N0 x 2n
qPCR 数学原理
N = N0×(1+e)n
N
产物分子数
N0
起始分子数
e
扩增效率
n
循环数
qPCR 数学原理