文档介绍：实验目的
染色原理
染色方法
实验材料
实验内容与步骤
注意事项
实验结果
一、实验目的
1. 学****微生物涂片,染色原理和染色的基本操作技术,从而掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法。
2. 巩固显微镜(油镜)的使用方法和无菌操作技术。
二、染色原理
由于微生物细胞含有大量水分,对光线的吸收和反射与水溶液的差别不大,机体是无色透明的,与周围背景没有明显的反差,在普通光学显微镜下不易识别,必须对它们进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构。
微生物细胞是由蛋白质、核酸等***电解质及其他化合物组成。所以,微生物细胞表现出***电解质的性质。***电解质兼有碱性基和酸性基,在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带正电。在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。
经测定,细菌等电点pH在2-5之间,故在中性、碱性或偏酸性溶液中,细菌的等电点均低于上述溶液的pH值,所以细菌带负电荷,容易与带正电荷的碱性染料结合,故用碱性染料染色的较多。微生物体内各结构与染料结合力不同,故可用各种染料分别染微生物的各结构以便观察。
三、染色方法
(一)简单染色法
简单染色法又叫作普通染色法,只用一种染料使细菌染上颜色,如果仅为了在显微镜下看清细菌的形态,用简单染色即可。
(二)复染色法
用两种或多种染料染细菌,目的是为了鉴别不同性质的细菌,所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。
革兰氏染色法:不仅能观察到细菌的形态,而且还可将所有细菌区分为两大类:染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌,用G+表示;染色反应呈红色(复染颜色)的称为革兰氏阴性细菌,用G-表示。细菌对革兰氏染色的不同反应,是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
四、实验材料
1. 显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接种环、载玻片、酒精灯等。
2. 石炭酸复红染液、草酸铵结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红(沙黄)染液
3. 菌种:表皮球菌、变形杆菌
用显微镜观察,并用铅笔绘出细菌形态图。
(二)细菌的革兰氏染色步骤
涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→复染→水洗→干燥→观察
(均以无菌操作)分别在同一张载玻片上做涂片、干燥、固定,方法均与简单染色的相同。
。
。
,滴加95%乙醇脱色,至流出的乙醇不现紫色为止,大约需时20~30s,随即水洗。
,水洗。
,待标本片干后置显微镜下,用低倍镜观察,发现目的物后用油镜观察,注意细菌细胞的颜色。绘出细菌的形态图并说明革兰氏染色的结果。