文档介绍：胃癌中miR-638对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及其分子机制研究
455000 2. 中国人民解放军火箭军总医院 100088
国家自然科学基金项目:低剂量辐射对树突状细胞迁移能力影响及其分子机制研究,课题编号:81202151
[摘要] 目的:阐释胃癌中miR-638 对胃癌细胞侵袭和迁移的影响,并证明它可能是通过影响细胞骨架调节蛋白VASP 的表达水平来抑制胃癌细胞侵袭和迁移的分子机制。
方法:通过Westernblot 检测VASP 蛋白表达水平;划痕损伤修复实验检测胃癌细胞迁移能力;-miR-638 的真核表达载体,转染入胃癌细胞BGC-823,过表达miR-638,:与对照组相比,过表达VASP3’UTR 使VASP 蛋白水平增加(P<);过表达VASP3’UTR 能促进胃癌细胞迁移(P<);与对照组相比,过表达miR-638 抑制胃癌细胞的迁移(P<);结论:过表达VASP3’UTR 增加VASP 蛋白水平,促进胃癌细胞的迁移;过表达miR-638 能抑制胃癌细胞的迁移;miR-638 直接靶向VASP3’UTR抑制胃癌细胞的迁移。
[关键词] 胃癌;miR-638;血管扩张刺激磷蛋白;迁移;侵袭
本文用芯片筛选胃癌和癌旁组织的microRNA 差异表达谱1-2,发现miR-610、miR-638 ;生物信息学软件分析发现miR-610、miR-638 可以与VASP mRNA 3’非翻译区不完全互补配对;本实验以miR-638 为契入点,培养胃癌细胞BGC-823,利用western blot、PCR、划痕损伤修复实验、luciferase 报告基因实验等实验技术,证实外源性过表达VASP3’UTR能促进胃癌细胞侵袭转移3。
1 材料与方法
材料
主要试剂:DMEM 培养基;胎牛血清;胰蛋白酶;EDTA-;十二烷基磺酸钠 Sigma;N,N,-亚甲双丙烯酰*** Fluka;丙烯酰*** Amresco;TEMED Sigma;单克隆鼠抗人VASP 抗体 Alexis Biochemicals;兔抗人GAPDH 抗体 Santa cruze;HRP 或AP 标记的羊抗鼠IgG Santa cruze;HRP 或AP 标记的羊抗兔IgG Santa cruze;BCA 蛋白浓度测定试剂盒北京普利莱公司;DAB 显色试剂盒北京天根公司;其余试剂均为国产或进口分析纯。
主要仪器:显微镜:XDS-1B 倒置显微镜,北京顺杰欣隆有限公司;DMBRI 倒置相差荧光显微镜:LEICA,Germany;BIO-1D 凝胶成像系统: 法国Vilber Lourmat 公司;超声破碎仪:美国Sonics&Materials 公司;凝胶成像分析系统:Syngene;PCR 仪:Eppendorf;SpectraMax M2 多功能酶标仪:Molecular Devices, USA;其余仪器均为国产。
胃癌细胞BGC-823:BGC-823细胞由我院保存。质粒:pcDNA