文档介绍：微生实验报告
姓名:王晶晖
专业年级:2011级生物技术
学号:040312011032
实验三细菌的芽孢染色
一、实验目的
学****细菌芽孢的染色方法原理及操作步骤。
二、实验原理
芽孢是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体,通常呈球形或椭圆形。细菌的芽孢具有厚而致密的壁,透性低不易着色,若用一般的染色法只能使菌体着色而芽孢不着色(芽孢呈无色透明状)。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色但一旦染上色后有难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于同一个原则,除了用着色力强的染料外,还需加热,以促进芽孢染色。当染芽孢时,菌体也会着色,然后水洗,芽孢染上的颜色难以渗出,而菌体会脱色,然后用对比度强的染料对菌体复染,使菌体和芽孢呈现出不同的颜色,因而能更明显地衬托出芽孢,容易辨认。
三、实验器材
1、菌种:培养24~36h的苏云金芽孢杆菌或者枯草芽孢杆菌。
2、染色剂和试剂:5%孔雀绿水溶液,%番红水溶液。
3、器材:小试管,滴管,玻片搁架,接种环,擦镜纸,镊子,显微镜等。
四、实验方法
1、涂片:按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。
2、晾干固定:待涂片晾干后在酒精灯火上通过2~3次。
3、染色:
(1)加染色液:加5%孔雀绿水溶液于涂片处(染料一铺满涂片为度),然后将涂片用试管夹夹住,用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽时开始计时,维持15~20min。加热过程中要随时交替添加染色液和蒸馏水,切勿让标本沸腾或干涸(加热时温度不能太高)。
(2)水洗:待玻片冷却后,用水轻轻地冲洗,直至流出的水中无染色液为止。
(3)复染:%番红水溶液染色3min。
(4)水洗、晾干或吸干。
(5)镜检:先用低倍物镜,再用高倍物镜,最后在油镜下观察芽孢和菌体的形态。
4、结果:芽孢呈绿色,菌体呈红色。
五、实验报告
六、实验分析
最后的形态观察还可以,只是由于第一次接触孔雀绿溶液,前几次的染色都不算成功。
七、思考题
1、为什么在孔雀绿染色液加热中,要等玻片冷却后才能用水洗?
答:因为热的玻片如果突然用水冲洗,那么很容易造成玻片的破损或破裂。
赞同
2、若涂片中观察到的只是大量游离芽孢,很少看到菌体,你认为这是什么原因?
答:
1、可能菌种培养的环境太恶劣了,营养体几乎都变成芽孢了。
2、可能复染出现问题,菌体没有染上颜色。
实验四细菌的鞭毛染色
一、实验目的
学****细菌鞭毛染色法的原理及方法。
二、实验原理
细菌是否具有鞭毛,以及鞭毛着生的位置和数量是细菌的一个重要的形态特征。细菌的鞭毛极细,~,只有用电子显微镜才能观察到。但是,如采用特殊的染色法,则在普通光学显微镜下也能看到它。鞭毛染色的方法很多,但其基本原理相同,即在染色前先用媒染剂处理,让其沉积在鞭毛上,使鞭毛直径加粗,然后再进行染色。常用的媒染剂由丹宁酸和***化高铁或明矾等配成。
三、实验器材
1、菌种:培养12~16h的变形杆菌或大肠杆菌斜面。
2、染色液与试剂:鞭毛染色液A液与毛染色液A液液,蒸馏水,香柏油,显微镜擦镜纸。
3、器材:载玻片,擦镜纸,吸水纸,记号笔,试管夹,镊子,接种环,双层瓶,显微镜。
四、实验方法
1、清洗玻片:选择光滑无裂痕的玻片,置于洗衣粉过滤液中煮沸