文档介绍：实验三细胞凝集反应
一、实验目的
学习研究细胞凝集反应的方法,了解细胞发生凝集反应的原因。
了解颗粒性抗原与可溶性抗原凝集反应的原理。
二、实验原理
红细胞凝集包括由病毒、细胞凝集素和抗体而引起的三种类型的细胞凝集现象。
凝集素(lectin)是从各种植物的种子和动物组织中提取的糖蛋白或结合糖蛋白,因为能凝集红细胞,故名凝集素。
凝集素最大的特点是能识别糖蛋白和糖脂中,特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构,即细胞表面的糖基。通过与细胞表面的糖分子相连,在细胞间形成桥,从而引起细胞的凝集。一种凝集素只对某一种特异的糖基具有
特异结合的能力,如刀豆素A与吡喃糖基甘露糖结合,马铃薯凝集素专一结合的是N-乙酰氨基葡萄糖二聚体和N-乙酰氨基半乳糖。加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集作用。
另外,凝集素还具有多价结合的能力,能与荧光素、酶生物素、铁蛋白、胶体金结合而不影响其生物活性,可用于光镜或电镜水平的免疫细胞化学研究。
三、相关理论知识
颗粒性凝集反应(agglutination)是一种血清学反应。颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体结合,在有电介质存在的条件下,经过一定时间,出现肉眼可见的凝集小块。参与凝集反应的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素。可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类。
颗粒状抗原(如细菌、红细胞等)与相应抗体直接结合所出现的凝集现象。分为玻片法和试管法。
1)玻片法是一种定性试验方法。可用已知抗体来检测未知抗原。若鉴定新分离的菌种时,可取已知抗体滴加在玻片上,将待检菌液一滴与其混匀。数分种后,如出现肉眼可见的凝集现象,为阳性反应。该法简便快速,除鉴定菌种外,尚可用于菌种分型、测定人类红细胞的ABO血型等。
将可溶性抗原(或抗体)先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的颗粒状载体的表面,然后与相应抗体(或抗原)作用。在有电介质存在的适宜条件下,即可发生凝集,称为间接凝集反应。用做载体的微球可用天然的微粒性物质,如人(O型)和动物(绵羊、家兔等)的红细胞、活性炭颗粒或硅酸铝颗粒等;也可用人工合成或天然高分子材料制成,如聚苯乙烯胶乳微球等。由于载体颗粒增大了可溶性抗原的反应面积,当颗粒上的抗原与微量抗体结合后,就足以出现肉眼可见的反应,敏感性比直接凝集反应高得多。
四、实验用品
1、器材和仪器
仪器:电子天平,大烧杯,小烧杯,显微镜,移液器,离心机,玻璃棒,镊子。
耗材:10ml小试剂瓶,载玻片,盖玻片,,擦镜纸,吸头。
2、材料: 马铃薯块茎、鸡血
2、实验试剂:
PBS缓冲液: NaCl , NaH2PO4 , KH2PO4 ,用蒸馏水定容至1000ml,。
生理盐水: NaCl加水定容至100ml。
%柠檬酸钠溶液:()加水定容至100ml。