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设计生物化学实验动物组织DNA的提取.ppt

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设计生物化学实验动物组织DNA的提取.ppt

上传人:小落意心冢 2024/2/26 文件大小:584 KB

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文档介绍:该【设计生物化学实验动物组织DNA的提取 】是由【小落意心冢】上传分享,文档一共【17】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【设计生物化学实验动物组织DNA的提取 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。设计生物化学实验动物组织DNA的提取实验目的掌握真核生物基因组DNA提取的一般原理通过动物组织DNA的提取,掌握DNA提取的方法和步骤动物细胞基因组在提取过程中一般有以下几步:;,糖类等细胞内杂质污染;。DNA提取原则保证DNA结构的完整性纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质排除有机溶剂和金属离子的污染蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度排除其他核酸分子的污染实验原理DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白(DNP),能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液中,而不溶于有机溶剂。十二烷基磺酸钠(SDS),十六烷基三***溴化铵(CTAB)等去污剂使蛋白质变性,与核酸分离。药品试剂与仪器设备药品试剂:动物组织生理盐水SDS三羟***氨基甲烷(Tris或三羟***甲氨基乙磺酸)EDTA饱和酚***仿异戊醇预冷无水乙醇75%乙醇蛋白酶K仪器设备:高速离心机冰箱水浴锅微量移液器手术剪刀镊子吸水纸研钵离心管操作步骤取新鲜小鼠肌肉组织3g,尽量剪碎,放入离心管中。,再加入50ulSDS,,充分混匀后,60℃水浴保温30-60min,不时颠倒混匀。放置到室温,加入饱和酚500ul颠倒混匀,3000r/。加入酚:***仿:异戊醇(25:24:1)500ul,颠倒混匀。3000r/。-20℃预冷的无水乙醇沉淀DNA,观察现象。,弃乙醇。7.-20℃预冷的75%乙醇洗涤,3000r/m离心5min,弃乙醇,55℃,再加入固体NaCl使沉淀最少,即DNA溶解度最大。3000r/m离心5min,吸取上清液加入乙醇析出。3000r/m离心5min,弃乙醇得到较纯净的DNA.