文档介绍：该【串联质谱联合高通量测序技术在新生儿遗传代谢病筛查诊断中的应用 】是由【小泥巴】上传分享，文档一共【4】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【串联质谱联合高通量测序技术在新生儿遗传代谢病筛查诊断中的应用 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。:..生殖医学杂志2023年4月第32卷第4期·临床实践·串联质谱联合高通量测序技术在新生儿遗传代谢病筛查诊断中的应用李勇,潘维君+,高成菊,何晶(马鞍山市妇幼保健院,安徽243000)【摘要】目的探讨串联质谱联合高通量测序技术在新生儿遗传代谢病(IEM)筛查诊断中的应用价值。方法回顾性分析2021年3—12月在我院新生儿疾病筛查中心筛查的4801例新生儿的临床资料,比较筛查结果正常的新生儿和存在IEM相关基因变异新生儿的基本特征(包括初筛日龄、性别、出生孕周及出生体重),并对存在IEM相关基因变异新生儿的具体变异情况和临床诊断加以分析。结果参与筛查的4801例新生儿中,56例新生儿经两次串联质谱法筛查后指标异常,进行IEM高通量测序基因检测提示19例存在基因变异。筛查结果正常的新生儿(行一4782)与存在基因变异新生儿(行一19)的初筛日龄、性别、出生孕周及出生体重均无显著性差异(P>)。19例存在IEM相关基因变异的新生儿中,1例ACAD8基因复合杂合变异患儿诊断为异丁酰辅酶A脱氢酶缺乏症(IBDD),2例SLC22A5基因变异携带者诊断为原发性肉碱缺乏症(PCD)。SLC22A5基因变异新生儿(咒一6)的游离肉碱(CO)水平显著低于SLC22A5无变异新生儿(押一4795)(P<);MCCl/MCC2基因变异新生儿(行一4)的丁二酰肉碱+3一羟基异戊酰基肉碱(C4DC+CSOH)l/MCC2无变异新生儿(咒=4797)(P<)。结论串联质谱联合高通量测序技术对新生儿IEM的筛查与诊断有较高价值;对于基因变异携带者,应结合临床进行诊断,避免漏诊。【关键词】串联质谱;高通量测序;遗传代谢病;新生儿【中图分类号】【文献标识码】A(JReprodIVied2023,32(04):590—593)遗传代谢病(Inbornerrorsofmetabolism,谱联合NGS技术对4801例新生儿进行IEM筛查IEM)是一类因基因变异导致的酶功能缺陷、细胞膜和诊断的结果,探讨串联质谱联合NGS技术在新生受体功能异常,从而引起代谢紊乱,并造成中间代谢儿IEM筛查与诊断中的应用价值。或旁路代谢产物蓄积的遗传性疾病[1],其代谢缺陷一、资料与方法包括氨基酸代谢、有机酸代谢、脂肪酸代谢等。:2021年3—12月在我院出生的自因其临床异质性,致死率和致残率较高[2],因此,早愿接受串联质谱筛查的4801例活产新生儿。期筛查和诊断对于IEM患儿至关重要。:足跟血片采集严格遵守《新生儿来,串联质谱技术(Tandemmassspectrometry)在疾病筛查技术规范》,采血时间为出生后72h,并经IEM中的应用是新生儿筛查的一项重要突破,实现6次以上充分NSL。取新生儿足跟血,滴至滤纸片,了一滴血一次测试可筛查和诊断几十种氨基酸、有自然渗透,每个滤纸片上采集血斑3个,,大大提高了IEM的筛查和诊mm,自然晾干后放于样品袋密封,置于2~8℃保存。断效率,在大规模群体筛查中显著降低了成本,:仪器和试剂主要包括美国WatersXEVO—TQD串联质谱仪,芬兰WallacOy了IEM的防治进程,为IEM的筛查、出生缺陷的防治带来了重大发展[3]。高通量测序技术(Next公司生产的非衍生化多种氨基酸、肉碱和琥珀酰***检测试剂盒(串联质谱法)与配套标准品,杭州杰generationsequencing,NGS)目前已逐渐成为基因诊断领域的主导技术,利用NGS技术针对IEM相【收稿日期12022—08—23;【修回日期12022—10—25关基因进行检测,可以使IEM由传统表型诊断上升【基金项目】马鞍山市医疗卫生领域科技计划项目(YL-2019—18)到分子病因诊断的新阶段。本研究回顾性分析我院【作者简介】李勇,男,安徽马鞍山人,学士,主管检验师,出生新生儿疾病筛查中心2021年3—12月采用串联质缺陷防控实验室技术方向.(+通讯作者)万方数据:..生殖医学杂志2023年4月第32卷第4期毅迈特医疗器械有限公司的新生儿筛查血斑质控品人基因组数据库(1000Genomes)、Gnomad数据库、(AA,AC)。C1inVar数据库查询,筛选基因致病性变异。实验流程:(1):;(2)配制内标工作液;(3)。计量资料经正态性检验后,均不符合孑L器对质控品和样品进行打孔,打出的血斑置入U正态分布,以中位数(四分位数)EM(P:。,P,。)]表型底96孔微孔板中,每孔放1个血斑;(4)每孔加入示,采用Mann-Whitney检验进行分析;计数资料以内标工作液100tA;(5)封膜后置振荡器内45℃率(%)表示,采用Kruskal—wallis检验。P<;(6)吸取75肚l萃取液转表示差异有统计学意义。移至V型底检测板内,铝箔封板;(7)静置2h后进二、结果行上机检测。:参与筛查的4801例新生儿中,:对于筛查结果显著高于参考截断筛阳性患儿482例,%。所有值的新生儿,立即召回复查,再次筛查后阳性的疑似初筛阳性患儿召回后进行串联质谱法二次检测,56患儿,经知情同意后,进行基因诊断。例新生儿二次筛查后指标仍然存在异常。:对再次筛查阳性的疑似患儿进行意,该56例疑似患儿均进行IEM基因检测,结果显NGS基因诊断。采集疑似患JLJ'b周血2ml于EDTA示19例新生儿存在基因变异。对筛查正常的新生抗凝管,经QiagenBloodDNAminiKit试剂盒JL(正常组)与存在遗传代谢基因变异的新生儿(变(Qiagen,德国)提取基因组DNA,超声波打断、建异组)进行比较发现,两组新生儿初筛时日龄、性别、库,使用华大DNBSEQ-T7基因测序仪测序,通过生物出生孕周、出生体重比较均无统计学差异(P>信息学分析后,进行人类基因突变数据库(HGMD)、)(表1)。表1筛查正常新生儿与存在遗传代谢基因变异新生儿的基本特征比较[-M(P。;,P,。),竹(%)]:19例带的新生儿,经随访排除IEM。19例新生儿具体基存在遗传代谢基因变异的新生儿中,经基因诊断和因变异和临床诊断信息见表2。II缶床诊断,(Isobutyl—coadehydrogenasedeficiency,l/MCC2基因无变异新生儿IBDD),2例新生儿确诊原发性肉碱缺乏症(primary的主要筛查指标比较:19例基因变异的新生儿中,incarnadinedeficiency,PCD)。19例新生儿中,除1存在SLC22A5基因变异的6例,l/+8C>2基因变异的4例。比较SLC22A5变异组外,其余均为基因变异携带者。18例基因变异携带(咒一6)与SLC22A5无变异组(咒一4795)的CO水者中,1例携带3个基因变异(>G;平发现,+14T>C;>G),l例SLC22A5无变异组(P<)(CO水平参考值:10~携带两个基因变异(^>T;CD32062肛mol/L)(表3)。MCCl/MCC2变异组(以一4)>T),其余16例均只携带1个基因变异。2丁二酰肉碱+3一羟基异戊酰基肉碱(C4DC+例SLC22A5基因变异携带者在出生后3个月内的C50H)l/MCC2无变异组(咒一随访中发现存在血浆游离肉碱(CO)持续低下和心4797)(P—)(C4DC+C50H水平参考值:~脏骤停,经临床诊断为PCD;)(表4)。万方数据:..生殖医学杂志2023年4月第32卷第4期表219例新生儿基因变异与临床诊断情况注:Co:游离肉碱;C2:乙酰基肉碱;C3:丙酰基肉碱;C3DC:丙二酰肉碱;C4:丁酰基肉碱;C4DC:丁二酰肉碱;C40H:3-羟基丁酰肉碱;C5:异戊酰基肉碱;C50H:3-羟基一异戊酰基肉碱;CSDC:戊二酰肉碱;C6:己酰基肉碱;C8:辛酰基肉碱;ClO:癸酰基肉碱;C14:1:肉豆蔻烯酰肉碱;PHE:苯丙氨酸;CIT:瓜氨酸。。。表3SLC22A5变异组与无变异组Co水平比较[M(P2s,P,s)]三、讨论新生儿IEM是一组罕见病,有研究显示,IEM在中国的总发病率约为1/3000[4]。新生儿IEM筛查的意义在于通过筛查对IEM患儿进行早期诊断和治疗,减少疾病的致死率和致残率,降低出生缺注:与SLC22A5无变异组比较,。P<。陷。近年来我国颁布了一系列关于新生儿IEM筛l/MCC2变异组与无变异组查的共识[5书],正在逐步规范和完善罕见病的筛查、C4DC+C50H水平比较[M(P2。,P,。)]诊治和随访。有研究显示,串联质谱联合NGS技术可以更全面地对疑似IEM患儿进行检测和评估,有组别例数C4DC+CSOH/(/zmol/L)助于指导进一步的临床治疗及遗传咨询[7均]。本研MCCl/(,)+究回顾性分析在我院新生儿疾病中心进行串联质谱MCCl/(,)筛查及NGS诊断的新生儿的临床资料,探讨这部分注:l/MCC2无变异组比较,*P<。人群IEM的发生情况、临床表型及热点突变之间的万方数据:..生殖医学杂志2023年4月第32卷第4期·593·内在联系。4797例MCUl/MC耽基因无变异新生儿(P<)。56例初筛阳性的新生儿经二次筛查后指标仍综上所述,采用串联质谱进行生化筛查联合存在异常,经基因诊断后发现19例新生儿存在遗传NGS基因检测,对新生儿IEM的筛查和诊断有较代谢基因变异,收集亲代及家族遗传病史信息未见高的应用价值;对于基因变异携带者应结合临床进明显异常或有明确意义者。本研究数据显示存在基行综合分析,避免IEM患儿的漏诊。因变异的新生儿与未发生基因变异的新生儿的初筛【参考文献】日龄、性别、出生孕周和出生体重比较均无显著性差异(P>),这与Wang等[10]的研究结果类似。E1]郝虎,[J].分子19例存在基因变异的新生儿经临床诊断和随访后,诊断与治疗杂志,2019,11:1-5,38.[23侯祥,[J].中国公1例确诊IBDD,2例SLC22A5基因变异携带者(均共卫生管理,2020,36:486->G)确诊为PCD。[3]WileyV,WebsterD,,theAsiaPacificregion,theworld[J].IntJNeonatalACAD8发生变异,导致异丁酰CoA在体内大量蓄Screen,2019,5:。IBDD的发病率约[4]顾学范,韩连书,].罕见病研究,2022,1:13—:62599,多数无特殊症状口1。。本研究中该患儿[5]国家卫生健康委员会临床检验中心新生儿遗传代谢病筛查的初筛丁酰基肉碱(C4)/-mol/L(参考值室间质评委员会,欧明才,~),复查c4/乙酰基肉碱(C2)为访专家共识[J].中华医学遗传学杂志,2020,37:367—(参考值0~),C4/辛酰基肉碱(C8)为[63赵德华,贾晨路,(~),与既往报道的病例资谢病筛查共识[J].中国实用儿科杂志,2020,35:180-184.[7]于爱真,冯雪,[11-12]类似,即IBDD主要存在C4水平的异常;因代谢病诊断中的应用[J].海南医学,2021,32:177—,对IBDD患儿进行C4水平检测至关重要。[8]王菊,[J].中国优生与遗传杂志,2021,29:蛋白OCTN2功能缺陷,导致尿中肉碱排出量增加,1739—[9]胡勤,何艺,[J].中国妇幼保健,2022,37:1891—。有数据显示,我国PCD发病率约为newborn[10]WangT,MaJ,ZhangQ,:2451314]。本研究中检出的2例SLC22A5基因forinbornerrorsofmetabolismbytandemmassspectrometry变异携带者经随访确诊为PCD,提示SLC22A5基inSuzhou,China:diseasespectrum,prevalence,haracteristics因可能存在诸如深度内含子、侧翼序列等变异情况inaChinesepopulation[J].,2019,10:。黄永兰等[13]报道了[11]FengJ,YangC,ZhuL,,genotypeandlong-termprognosisof40Chinesepatientswithisobutyryl-CoA两例PCD患者的基因诊断结果为阴性。dehydrogenasedeficiencyandareviewofvariantspectrain本研究中,1例新生儿检出3个基因变异(ETFAACAD8[J].JRareDis,2021,16:>G;+14T>C;SLC22A5[12]张晓娟,孙云,王彦云,>G),1例新生儿检出2个基因变异(MMAB患儿的临床及基因变异分析[J].中国优生与遗传杂志,>T;>T),提示IEM患儿可能2020,28:545—547,550.[131黄永兰,唐诚芳,刘思迟。。因此,IEM的基因诊断需要更加儿筛查评估及SLC22A5基因变异谱特征口].中华儿科杂志,全面。Yuan等[143就曾报道了1例患者同时患有甲2020,58:476-。[14]YuanH,DengS,GaoW,[J].MetabBrainDis,2021,36:447—,结果显示SLC22A5变异新生儿的co水平显著[15]陈大宇,谭建强,杨金玲,(P<);这与陈大宇析与疾病预防[J].中国优生与遗传杂志,2021,29:700-[151报道的结果类似。此外,l/MCC2基因变异携带新生儿的C4DC+C50H水平显著高于[编辑:肖晓辉]万方数据