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】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。万方数据甲双胍对高糖环境下的大鼠胎盘病理变化影响的机制研究实验研究·;通过和联合分析,筛选出殆馏、￡印⑿病辍縥、月】、舡口6姿抑瘟频男碌男в孟睿,魏莹,关丽娜斩’癷ǎ琖Ⅵ咒“,瓺Э趓芒鶳以芒。厂咒琋盘￡行口口九鋝￡曷摇阦/曲//【摘要】目的探究二甲双胍对高糖环境下的大鼠胎盘病理变化影响。方法将只造模成功的妊娠期糖尿病雌性大鼠随机分为糖尿病组褚投姿易。二甲双胍组采用二甲双胍灌胃给药,剂量为//浦调整药物剂量;糖尿病组给予等体积的饮用水,〔模还鄄旆治鎏ヅ套橹疕旧ǖ慕峁煌ü庑蛏秆〕霾钜毂泶锘颍⒍圆钜旎蚪蠫蚄患治觥结果二甲双胍组大鼠血糖显著低于糖尿病组,二甲双胍组的孕鼠体重、胎盘重、∽樘ヅ套萸忻婷婊灾变大、〕个差异表达基因,与糖尿病组相比,二甲双胍组上调基因觥⑾碌骰个;选取龌蚪惺凳倍縋验证,检测结果与庑蚪峁恢隆治鱿允静钜毂泶锘因主要富集在生物进程、细胞组分、分子功能等;富集结果提示信号通路、藕磐贰信号通路等结论二甲双胍的干预治疗可有效缓解妊娠期糖尿病大鼠胎盘的病理改变;转录组测序提示许多基因存在差异性表达,但其具体机制亟待进一步探究。【关键词】妊娠期糖尿病;胎盘;二甲双胍【中图分类号】.【文献标识码】』坦渲鋓咒珺歹鋑行鏳&珺歹【】竹一..国家卫生健康委科学技术研究所,北京;本┬鸵窖г貉芯可海本因。一咒口琒鋑—·趍瓽皀￡矗琍辤,咒一.。,.‘“.猄,,【收稿日期】一—;【修回日期】一—国家自然科学基金项目【作者简介】孟睿,女,辽宁沈阳人,硕士在读,:.:【基金项目】·万方数据妊娠期糖尿病是在妊娠期间以血糖升高为主要表现的代谢异常性疾病Lヅ淌且恢指叨茸ㄒ祷的临时性器官,调节着母体和胎儿之间的许多代谢活动。既往研究表明,妊娠期糖尿病的大鼠胎盘重量会显著增加5比焉锲谔悄虿》⑸保ヅ檀于低水平炎症状态I钊肓私馊焉锲谔悄虿∷致的胎盘病理改变的机制有助于更好的避免异常情况的发生,适当的药物干预有助于改善病理现象的发生和预后。二甲双胍作为一种低成本、有效、经典的糖尿病治疗药物,有关其在妊娠期使用效果的研究日渐增多。多项研究证实,妊娠期糖尿病孕妇使用二甲双胍后,孕妇血糖情况以及妊娠结局与单用胰岛素相似,同时孕期增重情况减少,较胰岛素更具优势‘。国内亦有大量研究表明,在孕早期及孕前应用二甲双胍,不但不会增加胎儿的畸形率,还能够一定程度上提高受孕率5ǘ姿叶杂诟咛环境下的胎盘病理变化影响的机制尚不明确。本研究拟通过构建妊娠期糖尿病的大鼠模型,对结合庑,在全基因组范围内探索大鼠只、雄性大鼠只购白北京维通利华实验动物技术有限公司,动物许可证号:一。将购置动物置于国家卫生健康委科学技术研究所实验动物中心饲养,动物中心维持温度在妫掌喽允6仍±ィ纾寡氛彰鳎Vご笫笫乘渥恪饕J约梁蜕璞福焊咧咛撬橇北京科奥协力谎L且罗氏,德国涣措遄艟国荒仕崮苹撼逡北京索莱宝谎嗡岫姿默克,德国籖提取试剂盒暇诺唯赞籄驲武汉爱博泰克籗凳倍锓肿榧耙┪锎恚航ü褐玫腟笫蠼行适应性喂养一周后,禁食舛n?崭寡L牵除空腹血糖≥/腟笫蟆8柩L:合笼交配,第二天:发现阴栓者记/⑸生殖医学杂志年碌淼期.,/仞,￡樱琖辍俊浚現╝妊娠期糖尿病大鼠进行二甲双胍干预,观察二甲双胍对妊娠期糖尿病大鼠的胎盘异常改变的治疗效果,并复杂疾病的分子机制,筛选与胎盘异常发育和功能相关的新基因和信号通路,以期发现新的治疗靶点。材料与方法一、实验材料笛槎铮篠级芰浯菩許片,美国二、研究方法正常大鼠高脂高糖饮食,喂养堋周后,将产生胰岛素抵抗大鼠以雌雄比例于每天:~为妊娠第天。禁食不禁水螅炷4笫缶一次性腹腔注射サ牧措遄艟溶液疞柠檬酸缓冲液配制,即孕后,孕鼠尾静脉取血,筛选随机血糖≥/呒次H焉锲谔悄虿〈笫蟆共有只大鼠造模成功。将妊娠期糖尿病大鼠分:.瑃———.瓽琧,,,,口口.,篏;.—觗·万方数据从各组组织中提取总軦,通过逆转录合成。样本重复椤J褂一蛳‘法进行定量计算,其中为糖尿病组和二甲双胍组。从妊娠第天起进行灌胃操作,二甲双胍组采用二甲双胍灌胃给药,参考孕妇给药剂量进行等效换算,选取更接近既往研究文献叫的给药剂量/蝑,每浦氐髡亮浚惶悄虿∽楦璧忍寤囊水,,给予大鼠***,取出胎盘样本。瓯静杉捍笫笤兄恋天,采取***,称体重,分离出胎盘,去掉多余组织,于生理盐水中冲洗干净并吸去多余水分。电子天平称重胎盘,得出胎盘系数ヅ滔凳%胎盘湿重/体重%=ヅ桃环治6话胫糜%甲醛溶液中固定,另一半置于液氮罐保存。橹衅癏旧ǎ航%甲醛溶液中固定好的大鼠胎盘进行石蜡包埋,并对结构完整样品进行切片烘干,保存备用。胎盘组织的石蜡切片经二甲苯脱蜡,再乙醇脱水后,放人苏木素液中染封片,于光镜下观察。重量相差较大的胎盘样本,每组觯褂檬约梁薪行崛 8葜圃焐痰乃得魇椋菇ㄎ目猓后在测序平台上对文库进行测序。对基因的表达水平以及转录本的表达水平分别进行定量分析,使用软件对多样本项目进行样本/组间基因的表达差异分析,进而研究差异表达基因的功能。显著差异表达基因的默认筛选标准为:,差异表达基因柰甭闵鲜隽礁鎏跫凳倍縋检测:利用崛∈约梁在凳倍縋仪上进行检测,引物序列详见表J褂胮魑D诓巍7从Τ绦蛉下:预变性℃姹湫嫱嘶稹⒗增鲅贩从Α2舛ù笫筇ヅ讨蠱舶纭阠加、谋泶锼健K△△为校准值。基于文献,分析验证转录组测序的实验数据。通过对结果的分析,验证转录组测序数据的准确性。结果进行富集分析,运用对结果进行精确检2钜炀哂型臣蒲б庖濉色偻ü梁煲喝旧蛔詈笾行允鹘ヅ套橹稲—庑颍貉∪×阶榧生殖医学杂志年碌淼期瓽蚄患治觯菏褂肎员敬验。,可以认定功能存在显著富集情况。使用员敬谓峁患治觯扑阍砑凹煅榉式与功能富集分析相同。校正的阈值为弦G蟮腒房以认定在差异表达基因中显著富集。三、,砑凶魍肌J笛槭菀跃数±标准差ァ纒硎荆榧浔冉喜捎谩昙煅椤结一、两组大鼠妊娠结局及胎盘状态比较阶榇笫筇ヅ毯旯圩刺叭焉锝峋直冉希二甲双胍组大鼠毛发、体形及精神状态明显优于糖尿病组。二甲双胍组大鼠血糖显著低于糖尿病组6姿易榈脑惺筇逯亍⑻ヅ讨亍⑻ヅ滔数及活胎数与糖尿病组均存在显著性差异表凳倍縋的引物序列果万方数据矽、、了■行、加、】五个基因甲双胍组矽、丁行的表达下阶榇笫筇ヅ套橹翁П冉希喝焉锏大鼠的胎盘组织分为悖和赡げ、连接层兔月。与二甲双胍组相比,糖尿病组大鼠的胎盘组织分层界限不明显,胎盘纵切面面积显著变大,胎盘厚度显著增加A阶橥赡层、连接层、迷路层的厚度存在显著差异生殖医学杂志年碌淼期天的大鼠胎盘经染色后,在光镜下可见二、两组大鼠胎盘的基因表达情况猄结果提示,糖尿病组与二甲双胍组之间共鉴定出鯠胩悄虿∽橄啾龋泶锷调基因觥⑾碌骰个4又醒≡进行实时定量难橹ぃ珼膍泶水平与庑蚪峁恢拢挥胩悄虿∽橄啾冉希调,￡雍蚐的表达上调图阶榇笫笕焉锲诩溲L潜浠榭表姿叶蕴悄虿〈笫筇ヅ碳叭焉锝峋值挠跋纒禾悄虿∽榇笫筇ヅ套萸忻×籅:糖尿病组大鼠胎盘纵切面各层分布情况;憾姿易榇笫筇ヅ套萸面;憾姿易榇笫筇ヅ套萸忻娓鞑惴植记榭×Wⅲ篖,迷路层;硬悖籇,蜕膜层。图阶榇笫筇ヅ痰男翁Ч鄄染色注:与糖尿病组比较,’表姿叶蕴悄虿〈笫蠹叭焉锝峋值挠跋纒注:与糖尿病组比较,’盤.。·万方数据虿皇誓:生物进程缍馏、￡⒁谝詉户、川等判鄣、藕磐包括胆、雄、细胞组分阥、詉行￡等⒎肿庸δ包感兴趣的狟信号通路═奢拍趈、等蟹治鲅芯图=岷螱蚄分析结果做进一步的数据检索,最终我们初步筛选厂、￡印押￡、九詎然蛭6三、大鼠胎盘组织差异表达基因的分析和分析治鼋峁崾荆钜毂泶锘蛑饕8患括矽、/阥加、■,等。从富集结果中,我们挑选了较为瘛闖、藕磐包括矽、以甲双胍治疗的新的效应基因,为后续深入研究提供前期的理论依据。讨论妊娠期糖尿病是一种复杂的代谢性疾病,其病理机制涉及多种蛋白质、酶和激素的变化。既往研究发现,并非所有降糖药联合胰岛素的治疗方式,都可以改善妊娠期糖尿病的胎盘状态!9识颐认为除葡萄糖水平外,还可能有其他因素参与妊娠期糖尿病胎盘改变的病理生理过程。二甲双胍作为一种低成本、有效、经典的糖尿病治疗药物,除了能调节血糖、有效延缓并治疗二型糖尿病外,还能通过抗炎、协助能量代谢等未知的方式为患者提供显著的保护效果,进而发挥多种临床作用口”“6远双胍作用机制的深入研究,⑾侄姿易榇笫筇ヅ谈层厚度均有显著变化,这可能与胎盘差异基因的表达、激素分泌、细胞的异常增殖等有关。生殖医学杂志年碌淼期图阶榇笫筇ヅ套橹钜旎蚍肿榫劾嗤两组胎盘中矽、啵拧⒍”А阥削、样本精版慨川图的相对表达量浏蝈搽莨靶《蜪川斑纱一万方数据诶●生殖医学杂志年碌淼期通过转录组测序,发现龌虮泶锊钜煜著,基于文献,我们从中选取了鯠惺凳定量橹ぁ取的研究表明,高血糖可诱发氧化应激、纤溶酶原激活物抑制剂一和基质金属蛋白酶泶镌黾樱致胎盘滋养层扩散;在等‘的研究中,妊娠期糖尿病患者胎盘中—藕糯ǖ嫉募せ睿样也会伴随着转录本和活性的增加,从而促进细胞侵袭。魑Q字⑾喙鼗颍谔ヅ发生炎症反应时,该基因表达降低。等‘两组间差异表达基因的生物学功能及分子信号通路的富集情况.\:一:喾中煤缎、辏篒篕;钳氍軭图猘猘≥上厶山·岛矗●、万方数据可以显著降低№息相关;实验结果也显示,≈械难芯磕转录组数据结果提示,糖尿病组中的恪辍縥的研究表明,妊娠期糖尿病患者的胎盘中的含量显著高于对照组,细胞凋亡数增加,其对胎盘示,、蚑表达变化与胎盘表达,提高的表达,该结果与之前报道较为一致,提示、癟很有可能是高糖引起胎盘异常的治疗靶点。对于前较少。等的研究表明,谌焉锲谔悄虿』颊咛ヅ毯脱=邢灾调,故认为血浆中的蚑可作为妊娠期糖尿病有效诊断的标志物。我们从和的结果中可以看到,.厂与多个生物发育进程息表达显著降低,提示其作为治疗靶点的潜娠前糖尿病的妇女生下的先天性心脏缺陷。最新报道,可以缓解妊娠期糖尿病胎盘的滋养层细胞损伤。在本实验中,以口在糖尿病组表达低于二甲双胍组;二甲双胍可能与盘发育进程、增殖迁移及病理改变密切相关,有可能是二甲双胍改善胎盘病理变化的潜在效应基因,后续我们将进一步进行差异表达验证和深入研究。综上所述,对于妊娠期糖尿病,二甲双胍的干预治疗可有效缓解妊娠期糖尿病大鼠胎盘的病理改变,更有利于维持大鼠的血糖水平及体重增长,并可以改善妊娠结局。同时我们还发现二甲双胍干预后的妊娠期糖尿病大鼠的胎盘中有许多基因的表达发生了显著变化,其具体调节机制还有待进一步探索。的损伤程度有待进一步的探索。以上报道结果显异常密切相关。本研究结果显示,二甲双胍给药后和行鵰能。在高血糖诱导的氧化应激引起的妊儿童的心脏中呈低表达水平¨。暴露于母亲的妊娠期糖尿病的胎儿患先天性霾〉姆缦栈崽岣撸胎儿肾脏进行检测,结果提示表达减少。结合我们和的结果可以看出,在内分泌及细胞内外信息交换中有着至关重要的作用,我们后续将进行深入研究。另外我们将和进行联合分析,还发现一些与胎盘异常相关的新基因。其中作为一种基质糖蛋白,参与弹性纤维的形成,并在准备子宫内膜以进行胚胎植入中起作用州。本研究结果发现,糖尿病组的以表达显著低于二甲双胍组,初步推测二甲双胍通过狟信号通路,以以为靶基因改善胎盘子宫发育的相关进程。表达高于二甲双胍组。据文献报道,通过下调的表达,可以显著减少先兆子痫胎盘滋养层细胞的增殖和迁移。根据结果分析推断,二甲双胍可能通过藕磐罚0械阌跋焯ヅ套萄阆赴脑鲋澈颓ㄒ情况。子宫内膜异位症的内膜中组蛋白去乙酰化酶蛋白含量减少,作为小鼠和人类闹苯影斜辏斐WB技せ罨嵋鹜赡化缺陷信号通路中的密切相关。上述基因与胎生殖医学杂志年碌淼期【参考文献】.︹溃醯路遥〖亮苛措遄艟亟⑷焉锲谔悄虿大鼠模型的研究执静平梗—蚊蠲睿焉锲谔悄虿【薮蠖ヅ坛⒔峁辜疤峭废喙匦研究靼玻荷挛魇∥靼惨窖г海/:厦哦鹊核刂瘟迫焉锲糖尿病的疗效及对妊娠结局和新生儿的影响窖Ю砺栋⑼姿伊:弦鹊核刂瘟迫焉锲谔悄虿〉男Ч捌对母儿的影响泄涤孟绱逡缴又荆跷睦觯趸垩蓿姿叶匀焉锲谔悄虿∽饔玫难芯拷泄静屏俅苍又荆—瓵珿,,口甁与实践,,:—.,:—.厂,,:.。一築籅,,.瑀琾:.珽。—。,一。琋珻万方数据生殖医学杂志年碌淼期/瓼..../..,,,—.甊現:琫.“—琓琀畇,.琍,·,,:—..:,:琈現猯,,:,,:.一,,.瑉..篹::.,.,:.緄:—琧珼—.籉.