文档介绍：还原糖的测定 3,5-二硝基水杨酸比色法
班级: 生科2班
姓名: 胡雨雨
同组人:张贤明
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实验目的
1. 掌握还原糖和总糖测定的基本原理。
2. 学****比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
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实验原理
还原糖是具有还原性的糖类的统称。分子中含有游离醛基或者***基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。在碱性条件下,还原糖与 3 , 5 一二硝基水杨酸共热, 3 , 5 一二硝基水杨酸被还原为 3-氨基-5- 硝基水杨酸(棕红色物质),还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系, 540nm 波长下测定棕红色物质的消光值,查对标准曲线并计算,便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
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仪器、试剂、材料
仪器:
( 1 )试管X 11 ( 2 )玻璃漏斗 X2 ( 3 )烧杯: 1OOml X 1 ( 4 )三角瓶: 100m1 X 1 ( 5 )容量瓶: 100ml X 3 ( 6)恒温水浴( 7)沸水浴( 8)电子天平( 9)分光光度计
试剂:
( 1 ) 1 mg/ ml 葡萄糖标准液:准确称取 10mg 分析纯葡萄糖(预先在 8 0 ℃烘至恒重),置于小烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,定量转移到 10ml 的容量瓶中,以蒸馏水定容至刻度,摇匀,冰箱中保存备用。( 2 ) 3 , 5- 二硝基水杨酸试剂:将 3, 5- 硝基水杨酸和 2mol/NaOH溶液,加到 25ml 含有 酒石酸钾钠的热水溶液中,再加 结晶酚和 亚硫酸钠,搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至 50ml ,贮于棕色瓶中备用。
材料:
食用面粉。
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注意事项
1. 沸水浴时应将试管口用保鲜膜封住,以防止水分蒸发引起体积误差。
2. 应该待反应体系稳定后进行比色(约10min)。
3. 比色时,比色皿中盛放的溶液体积不应过多,一般在2/3~3/4。
4. 比色时不能将溶液溅在仪器面板和仪器内。
5. 标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行,一起显色和比色。
,放回原位。
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实验步骤
管号
1mg/ml葡萄糖标准液(ml)
蒸馏水
(ml)
DNS
(ml)
葡萄糖含量(mg)
光密度值
0
0
2
0
1
2
3
4
5
6
6
实验步骤
按照上表取7支试管配好试剂,将各管摇匀,在沸水浴中加热 5min ,取出后立即冷却至室温,再以蒸馏水定容至 25ml ,混匀。在 540nm 波长下,用 0 号管调零,分别读取 1-6 号管的吸光度。以吸光度为纵坐标,葡萄糖毫克数为横坐标,绘制标准曲线。
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实验步骤
得出吸光值
管号
1mg/ml葡萄糖标准液(ml)
蒸馏水
(ml)
DNS
(ml)
葡萄糖含量(mg)
光密度值
0
0
2
0
0
1
2
3
4
5
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实验步骤
以吸光度为纵坐标,葡萄糖毫克数为横坐标,绘制标准曲线
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实验步骤
2. 样品中还原糖和总糖含量的测定 
样品中还原糖的提取:准确称取 食用面粉,放在 50ml 三角瓶中,先以少量蒸馏水调成糊状,然后加 25ml 蒸馏水,搅匀,置于 5 0 ℃恒温水浴中保温 20min ,使还原糖浸出。离心,用 2Oml 蒸馏水洗残渣,再过滤,将两次的滤液全部收集在 50ml 的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,混匀,作为还原糖待测液。
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