文档介绍：实验二  食品中还原糖及总糖的测定
实验项目性质:基础验证实验
所属课程名称:生物化学
实验计划学时:6学时
一、实验目的与要求
实验目的:
通过本实验的学****能够使学生掌握DNS比色测定糖浓度的基本方法。通过本实验使学生进一步熟练掌握分光光度计及低速离心机等生化设备的使用。
实验要求:
1、了解掌握糖类相关知识,并熟练掌握分光光度计的使用方法。
2、三人一组,互相配合开展实验,动手完成实验,并记录并分实验中的实验现象、数据,必要时及时修改实验计划。
3、总结试验数据,在老师认定后,撰写实验报告。
二、实验原理
利用3,5-硝基水杨酸比色定糖法(DNS法)进行测定。3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系,可用于比色测定。操作简便,快速,杂质干扰较少。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或***基的糖类,单糖都是还原糖,双糖和多糖不一定是还原糖,其中乳糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物,3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计,在540nm 波长下测定光密度值,查对标准曲线并计算,便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时,每断裂一个糖苷键需加入一分子水,。
三、实验主要仪器设备
四、实验方法、操作步骤
(一)葡萄糖标准曲线的制定
葡萄糖标准液的配制:准确称取100mg分析纯的无水葡萄糖(预先在105℃干燥至恒重),用少量蒸馏水溶解后,定量转移到100mL容量瓶中,再定容到刻度,摇匀。浓度为l mg/mL。
取9支25mm×250mm的试管,分别按下表加入试剂:
项目
0
1
2
3
4
5
6
7
8
葡萄糖标准液(mL)
0
相当于葡萄糖量(mg)
0
蒸馏水(mL)
DNS试剂(mL)
 
将各管溶液混合均匀,在沸水浴中加热5min,取出后立即用冷水冷却到室温,,摇匀。于540nm波长处测定吸光度。以葡萄糖mg数为横坐标,光吸收值为纵坐标,绘制标准曲线。
(二)还原糖待测样品的制备
可选取固体样品(马玲薯粉、小麦粉、方便面、饼干等)或液体样品(各种含糖饮料)进行测定,粉末状固体样品和液体样品可直接进行测定,非粉末固体样品可使用研钵研磨成粉末再进行测定。
固体样品:准确称