纯化蛋白,实验总结.doc

文档介绍：实验汇总

实验内容
近两周主要做了肿瘤多肽疫苗Vbp3的诱导表达和纯化以及鉴定实验。
学****培养细胞一些技能,给细胞换液并传代,自己培养了一瓶E3细胞,并学****处理细胞,传代,计数。学****使用倒置显微镜观察细胞,以及细胞实验室的一些注意事项。
3 取得杂交瘤细胞,然后我给小鼠注射,。
实验结果
先培养了菌株进行原核表达多肽,经过表达后SDS-PAGE电泳鉴定可以得出目的蛋白得到了表达。通过与Maker对比可以看出有目的蛋白表达。
然后进行超声破碎菌体,使表达的蛋白裂解,然后进行洗脱纯化。洗脱液的浓度梯度分别为5mM 咪唑,20 mM 咪唑,80mM 咪唑,250 mM 咪唑,500mM 咪唑。通过SDS-PAGE电泳鉴定出,在250 mM 咪唑处有目的蛋白被洗脱出。如下图所示:
Maker 样品 PBS洗脱 5Mm 20 mM 80 mM 250 mM 500mM 250Mm

图中开始加的为maker,然后为裂解后未洗脱的样品,然后pbs,接着是不同浓度的咪唑洗脱下来的蛋白。
在不同浓度洗脱液的紫外峰值分别为:

不同浓度洗脱液
最高峰值
最低峰值
Pbs 洗脱
258
10
5 mM
31
10
20 mM
25
9
80 mM
64
15
250 mM
87
30
500 mM
60
20
3以bFGF 为抗原包板做ELISA实验,以鼠单抗和人源化抗体为一抗,以羊抗鼠酶标抗体为二抗,进行检测鼠单抗的效价。结果如下表所示:
Measurement count: 1 Filter: 450
1
2
3
4
20000






0

40000








80000








160000






0

320000