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含5μL人基因组模板,75mmol/LTris-,20mmol/L(NH4)2S04,%Tween20,50mmol/LKCl,IU热启动Taq酶,3mmol/LMg2+,,,。PCR反应程序为:95°C3分钟;95°C15秒,55°C25秒,72°C20秒,50个循环;55°C退火阶段采集荧光信号。图5显示四组掺入的模板扩增曲线良好,呈现一定的梯度,无模板的阴性质控未出现扩增曲线,该模拟实验再次说明本技术方案可以检测到突变型与野生型比例为1:1000的模板,且仍有潜力实现更高的选择性。本发明的关键在于野生型模板的上游引物中的标签序列与上游引物扩增产物的部分序列形成内部颈环结构,该颈环结构在扩增过程中形成非常稳定的