文档介绍：ISSN 0001-6209; CN11-1995/Q
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3种植物花螺原体的分离及其基本特性
于汉寿,阮康勤,纪燕玲,陈永萱,王志伟
(南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室,南京 210095)
摘要:【目的】调查我国植物花上的螺原体的存在,搜集我国的螺原体资源,并研究它们的基本生物学特性。【方法】常规螺原体分离、培养方法,应用暗视野显微镜和透射电子显微镜观察螺原体形态,根据16S rDNA和ITS序列构建系统发育树研究螺原体分离菌株可能的分类地位。【结果】分别从油菜(Brassica napus)、杜鹃(Rhododendron simsii)、红花酢浆草(Oxalis corymbosa)R-R-A-1、CRW-1,对其形态、部分生理生化特性及分子生物学特性进行了初步研究。这4株螺原体在R-2液体培养基中生长良好, mm的微孔滤膜;在R-2固体培养基上呈圆形或颗粒状菌落,菌落直径约50~600 mm;在生长的某个阶段可呈典型的螺旋状,~ nm,~ mm;它们都能利用葡萄糖作为碳源,不能利用尿素;在不含胎牛血清的R-2培养基中,它们都不能生长;R-A-1能强烈代谢精氨酸,而CNR-2和CRW-1不能代谢精氨酸;在氨苄青霉素钠浓度高达2000 U/mL的R-2培养基中,分离菌株生长良好。根据16S rDNA序列构建的系统发育树显示,R-R-A-1与蜜蜂螺原体Spiroplasma melliferum聚类较近,而CRW-1与S. clarkii聚类较近;根据ITS序列构建的系统发育树显示,CRW-1形成一个单独的分枝,其它3个菌株仍与S. melliferum聚类。【结论】以上结果初步表明,R-R-A-1极有可能是Spiroplasma melliferum,而CRW-1可能是一个新的螺原体种,但还需要血清学试验进一步验证。
关键词:螺原体;生物学特性;油菜;杜鹃;红花酢浆草
中图分类号: 文献标识码:A 文章编号:0001-6209 (2008) 09-1141-06
螺原体(Spiroplasma)是硬壁菌门(Firmicutes)柔膜菌纲(Mollicutes)的一类螺旋状、无细胞壁的原核生物,它们基因组小(~ Mb),是能独立生活和自我复制的最简单的原核微生物[1]。作为一类重要的微生物资源,由于其形态结构和营养代谢的特点,螺原体常作为研究生物膜和运动的模式生物受到关注[2, 3]。
绝大多数螺原体分离自昆虫和扁虱,在几种植物体内或花表也分离到螺原体[4]。有些螺原体对宿主有致病性,如螺原体Spiroplasma apis和S. melliferum导致蜜蜂(Apis spp.)“五月病”(May disease)和“爬蜂病”,S. citri,S. kunkelii和S. phoneiceum分别引起柑橘顽固病(Citrus stubborn)、玉米矮缩病(Corn stunt)和紫苑黄化病(Aster yellow),而大多数螺原体和宿主之间是共生(Mutualism)mensalism) 关系[4]。
有许多研究证实花上螺原体与昆虫之间有密切的关系,Clark