文档介绍：该【拟南芥过氧化氢酶敲除载体构建 】是由【小屁孩】上传分享，文档一共【12】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【拟南芥过氧化氢酶敲除载体构建 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锁遗传(AT1G20630,AT1G20620),因此通过杂交获得三突变体(cat1cat2cat3)基本上是不可能的。RNAi作为一种反向遗传学的研究方法,为后基因组时代的基因功能分析提供了一种应用技术平台,但其成本高、效率低。:..ZFN和TALEN系统基于蛋白质工程[23-24],构建较困难,而且由于切割时以二聚体的形式发挥作用,需要成对设计,技术难度较大,构建组装时间较长。病毒诱导的基因沉默,如TRV-VIGS载体进行转录后基因沉默时,其效果容易受很多因素影响[25]。然而本研究所使用的CRISPR/Cas9基因编辑系统因其克隆策略相对简单、成本低廉,可多靶点敲除且敲除效率高[16],因而在生物学界获得了广泛的关注。且研究表明CRISPR/Cas9已成功且高效率地应用到水稻、番茄等多种植物中,并且本研究在原有技术的基础上实现了多靶点多基因敲除载体的构建,每个基因分别有2个靶点,从而提高了基因敲除的效率。本文成功构建了CAT1,CAT3CRISPR/Cas9多靶点双元载体,对深入研究CAT相关功能提供了重要的遗传方法。[参考文献][1]TILLBJ,REYNOLDSSH,GREENEEA,-scalediscoveryofinducedpointmutationswithhigh-throughputTILLING[J].GenomeRes,2003,13(3):524-530.[2]COLBERTT,TILLBJ,TOMPAR,[J].PlantPhysiol,2001,126(2):480-484.[3]URNOVFD,REBAREJ,HOLMESMC,[J].NatureReviewsics,2010,11(9):636-646.[4]BEDELLVM,WANGY,CAMPBELLJM,-efficiencyTALENsystem[J].Nature,2012,491(7422):114-118.[5]RICHTERH,RANDAUL,:interferencemechanismsandapplications[J].InternationalJournalofMolecularSciences,2013,14(7):14518-14531.[6]DICARLOJE,NORVILLEJE,MALIP,:..haromycescerevisiaeusingCRISPR-Cassystems[J].NucleicAcidsResearch,2013,41(7):4336-4343.[7]GAJT,GERSBACHCA,,TALEN,andCRISPR/Cas-basedenomeengineering[J].TrendsinBiotechnology,2013,31(7):397-405.[8]JINEKM,CHYLINSKIK,FONFARAI,-RNA-guidedDNAendonucleaseinadaptivebacterialimmunity[J].Science,2012,337(6096):816-821.[9]BLACKBURNPR,CAMPBELLJM,CLARKKJ,-argetingfresh[J].Zebrafish,2013,10(1):116-118.[10]KIRKMANHN,:avenerableenzymewithnewmysteries[J].TrendsinBiochemicalSciences,2007,32(1):44-50.[11]ZAMOCKYLLERPG,[J].AntioxidantsandRedoxSignaling,2008,10(9):1527-1547.[12]WILLEKENSH,INZéD,VANMONTAGUM,[J].MolecularBreeding,1995,1(3):207-228.[13]FRUGOLIJA,ZHONGHH,IOML,(L.)Heynh[J].PlantPhysiology,1996,112(1):327-336.[14]GUANL,[J].JournalofMolecularEvolution,1996,42(5):570-579.[15]IWAMOTOM,HIGOH,:the5′-flankingregionofCatAisnotsufficientforcircadian:..control[J].PlantScience,2000,151(1):39-46.[16]MAX,ZHANGQ,ZHUQ,,high-efficiencymultiplexgenomeeditinginmonocotanddicotplants[J].MolecularPlant,2015,8(8):1274-1284.[17]TZFWAT,[J].TrendsBiotechnol,2005,23(12):567-569.[18]HUYQ,LIUS,YUANHM,-and3′-untranslatedregionexchangeexperimentsintheArabidopsiscat2photorespiratorymutant[J].PlantCellEnviron,2010,33(10):1656-1670.[19]MHAMDIA,,:peroxisomalredoxguardians[J].ArchBiochemBiophys,2012,525(2):181-194.[20]QUEVALG,.Aplate-readermethodforthemeasurementofNAD,NADP,[J].AnalBiochem,2007,363(1):58-69.[21]SMYKOWSKIA,ZIMMERMANNP,-Boxbindingfactor1reducesCATALASE2expressionandregulatestheonsetofleafsenescenceinArabidopsis[J].PlantPhysiology,2010,153(3):1321-1331.[22]MHAMDIA,QUEVALG,CHAOUCHS,:afocusonArabidopsismutantsasstress-mimicmodels[J].JExpBot,2010,61(15):4197-4220.[23]KUMARS,ALLENGC,:fingersonthemove[J].TrendsinPlantScience,2006,11(4):159-161.:..[24]程曦,王文义,:植物生物技术的机遇与挑战[J].生物技术通报,2015,31(4):25-33.[25]马红珍,裴冬丽,耿慧霞,[J].西北植物学报,2009,29(8):1531-1537.