1 / 2
文档名称:

植原体免疫膜蛋白Imp的原核表达及多克隆抗体制备的综述报告.docx

格式:docx   大小:11KB   页数:2页
下载后只包含 1 个 DOCX 格式的文档,没有任何的图纸或源代码,查看文件列表

如果您已付费下载过本站文档,您可以点这里二次下载

分享

预览

植原体免疫膜蛋白Imp的原核表达及多克隆抗体制备的综述报告.docx

上传人:niuwk 2024/4/17 文件大小:11 KB

下载得到文件列表

植原体免疫膜蛋白Imp的原核表达及多克隆抗体制备的综述报告.docx

相关文档

文档介绍

文档介绍:该【植原体免疫膜蛋白Imp的原核表达及多克隆抗体制备的综述报告 】是由【niuwk】上传分享,文档一共【2】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【植原体免疫膜蛋白Imp的原核表达及多克隆抗体制备的综述报告 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。植原体免疫膜蛋白Imp的原核表达及多克隆抗体制备的综述报告植物细胞具有免疫保卫机制,在遭受外界病原体入侵时,会产生一系列的反应来对抗病原体。其中的免疫膜蛋白Imp(ImmobilizedPathogen)便是起关键作用的蛋白质。Imp可感知外界病原体(如病菌或病毒),并激发与之互作的免疫反应,持久性地保护植物免受病害侵袭,因此,Imp的研究具有重要意义。本文将重点讨论Imp在原核表达中的相关技术及多克隆抗体制备的综述。一、Imp在原核表达中的相关技术Imp基因序列的克隆Imp基因首先需要从参考文献中得到相应的序列。序列获得后,可通过PCR扩增、单独克隆或细胞库中的基因片段,获得Imp的DN***段。载体构建Imp基因在原核表达中需要与表达载体结合进行表达,因此需要构建表达载体。目前常见的载体有pET系列、pGEX系列、pMAL系列等。其中,pET系列是最常用的适用于原核表达的载体。通过将Imp基因与表达载体连接,形成重组质粒并转入宿主细胞中进行表达。检测及纯化得到过表达的原核Imp蛋白后,需要对蛋白的纯度进行检测。可以采用SDS-PAGE、Westernblotting等方法进行蛋白质分离鉴定。检测到的纯度不高的Imp蛋白需要进行层析纯化,使用的方法有亲和层析、凝胶过滤层析、离子交换层析等方法进行纯化。纯化获得的Imp蛋白可用于多克隆抗体的制备。二、Imp多克隆抗体制备免疫原制备制备Imp多克隆抗体,需要首先制备免疫原。纯化后的Imp蛋白需要进行垂直线性化处理,以使其成为分子大小的单一种类,通过SDS-PAGE等电泳方法,观测蛋白经洗去SDS后的聚合状态,选择合适的峰进行离析,微量分子量渗透试验(POPs)进一步鉴定蛋白纯度。然后直接给动物免疫,或将免疫原和佐剂混合后再给动物免疫。动物免疫及血清采集选择常用的小鼠、大鼠、兔、鸡等动物为免疫对象。为提高抗体的效价与特异性,免疫前可进行佐剂和次级处理。佐剂常用完全弗氏佐剂(Freund’sCompleteAdjuvant,FCA)或不完全弗氏佐剂(Freund’pleteAdjuvant,FIA)。免疫剂量可根据免疫原和实验动物的敏感程度等进行调整。多次免疫后,采集动物血清,并进行抗体效价的鉴定。抗体鉴定采用简单血凝试验可以对抗体进行初步的鉴定。对于鉴定质量较高的抗体,可通过ELISA、Westernblotting、免疫组织化学染色等方法进行进一步的确认。总结:使用原核表达技术制备Imp蛋白质是一种快速、简便、便宜的方法,能够快速获得免疫原。本文还介绍了Imp多克隆抗体的制备步骤,抗体制备可为Imp的进一步研究提供基础支持。感兴趣的研究者们,可参考本文进行更深入的研究。

最近更新