文档介绍：该【一种利用病毒载体诱导番茄抗tylcv的方法 】是由【开心果】上传分享，文档一共【4】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【一种利用病毒载体诱导番茄抗tylcv的方法 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。一种利用病毒载体诱导番茄抗tylcv的方法一种利用病毒载体诱导番茄抗tylcv的方法本发明为一种利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法,其特征在于:利用病毒载体在番茄体内表达病毒序列而诱导番茄对病毒产生抗性,根据已经报道的TYLCV基因组序列,利用生物信息学软件(DNAStar,Madison,WI,USA)分析寻找其保守区段(ΔRep),设计引物,以TYLCV侵染的番茄叶片总DNA为模板,扩增克隆目的保守片段(约350nts)。将该片段反向重复插入TYLCV随机序列两侧(约200nts)。再用限制性酶BamHI和EcoRI介导克隆至沉默载体TRV2中,构建基于RNA干扰的表达hpRNA的植物沉默载体TRV2-ΔRep,利用电击法导入农杆菌EHA105,浸润番茄幼苗上部刚刚完全展开的叶片,从而使番茄获得对TYLCV的抗性。采用本发明的方法,可以快速使番茄获得对TYLCV的抗性,大大节约了传统育种的成本。【专利说明】一种利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法一、【技术领域】:[0001]本发明涉及简便诱导番茄对TYLCV产生抗性的方法,具体是一种利用番茄自身抗病毒的规律,通过在番爺植株体内表达病毒序列从而使番爺植株产生对病毒的抗性。二、【背景技术】:[0002]番爺黄化曲叶病毒(Tomatoyellowleafcurlvirus,TYLCV)是世界范围内广泛存在的一种植物单链DNA病毒,该病毒对番茄生产造成了严重的危害。自2006年该病害首次在我国上海地区发现以来,该病害已经蔓延到了浙江、江苏、山东、河北等地,对我国的番茄生产构成了很大的威胁。RNA干扰(也称RNA沉默)是近年发现的植物对病毒的自然抗性机制,利用该机制进行番茄抗TYLCV的研究有望获得广谱高抗的番茄材料,同时可为进一步揭示RNA介导的抗病机理研究提供理论依据,因而具有重要的理论意义和应用前景。三、【发明内容】:[0003]本发明提出一种通过利用病毒载体在番茄植株体内表达TYLCV序列从而诱导番茄对TYLCV产生抗性的方法。[0004]本发明是这样实现的:利用病毒载体在番茄体内表达病毒序列而诱导番茄对病毒产生抗性,根据已经报道的TYLCV基因组序列,利用生物信息学软件(DNAStar,Madison,WI,USA)分析寻找其保守区段(ΛRep),设计引物,以TYLCV侵染的番茄叶片总DNA为模板,扩增克隆目的保守片段(约350nts)。将该片段反向重复插入TYLCV随机序列两侧(约200nts)。再用限制性酶BamHI和EcoRI介导克隆至沉默载体TRV2中,构建基于RNA干扰的表达hpRNA的植物沉默载体·TRV2-ΔRep,利用电击法导入农杆菌EHA105,浸润番茄幼苗上部刚刚完全展开的叶片,从而使番茄获得对TYLCV的抗性。采用本发明的方法,可以快速使番茄获得对TYLCV的抗性,大大节约了传统育种的成本。[0005]本发明的有益效果是:这种方法可以快速使番茄获得对TYLCV产生抗性,省去传统育种多代杂交选育的过程,节省了劳动力,降低成本。四、【具体实施方式】:[0006][0007]根据已经报道的TYLCV基因组序列,利用生物信息学软件(DNAStar,Madison,WI,USA)分析寻找其保守区段(ΛRep),设计引物,以TYLCV侵染的番茄叶片总DNA为模板,扩增克隆目的保守片段(约350nts)。[0008][0009]将该片段反向重复插入双生病毒随机序列两侧(约200nts)。再用限制性酶BamHI和EcoRI介导克隆至沉默载体TRV2中,构建基于RNA干扰的表达hpRNA的植物沉默载体TRV2-ΔR印,利用电击法导入农杆菌EHA105。[0010]3病毒载体的接种[0011]将农杆菌在平板培养基上划线培养,~,利用注射器注射浸润番茄幼苗上部刚刚完全展开的叶片,番茄苗岭控制在3~4片真叶期。【权利要求】,其特征在于:利用病毒载体表达病毒序列从而诱导番茄对TYLCV产生抗性。,其特征在于:所使用的病毒载体为TRV2,所表达的序列为TYLCV序列。,其特征在于:构建的载体利用电击法导入农杆菌,再通过农杆菌浸润番茄叶片将病毒载体导入番茄植株内表达。·