文档介绍：该【马哈利樱桃砧木快速繁殖方法 】是由【开心果】上传分享，文档一共【17】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【马哈利樱桃砧木快速繁殖方法 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。马哈利樱桃砧木快速繁殖方法专利名称:马哈利樱桃砧木快速繁殖方法技术领域:本发明属于植物组织培养技术的植物再生,以及未分化的人类、动物或植物细胞技术领域,具体涉及到马哈利樱桃砧木的快速繁殖方法。采用植物组织培养方法可以在短期内快速繁殖多种植物,不仅繁殖速率极高,且因为其是无性繁殖,可以保持原繁殖母株的优良性状,近年来在生产上应用越来越广。植物组织培养技术的原理是利用植物细胞的全能性,即组成植物体的每一个细胞都具有发育成为一个完整植株的潜在能力,采取植物体上的单个细胞、细胞团、分生组织或器官的一部分,通过人工配制不同营养成分和激素的培养基来培养并调控其发育,使这些细胞、组织等形成成千上万个小植株并且保持了母本植株的全部的优良性状,这种方法可以在短时间内获得大量的组培苗,并能在人工控制条件的车间内一年四季进行,因而可以实现种苗繁殖的工厂化生产,可在较小的面积内进行大规模生产,因而无需占用大量土地。上述的植物组织培养方法,先培养成无根苗,再将无根苗在生根培养基中诱导生根,长苗和生根在两种不同培养基中进行,在繁殖生根培养和炼苗阶段,通常先在室内培养一段时间,然后移到自然光下进行长苗和炼苗。增加了繁殖生根培养和炼苗时间。马哈利樱桃砧木组培苗生根困难,移栽成活率低使其一直无法实现大规模工厂化生产,至今国内外尚未见到实现工厂化生产马哈利樱桃砧木苗的报道。(2)组培苗生根培养将(1)中切好的组培苗或茎段放入生根培养基中进行生根培养,该生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成白砂糖15~80g琼脂粉4~10g吲哚-3-~~80g琼脂粉4~~,每瓶25~35毫升,盖好瓶盖,~,培养瓶移入温度为18℃~22℃、湿度为70%~90%的暗室中进行暗培养,暗培养3~7天;(3)长苗炼苗培养将经过暗培养的培养瓶直接移入光照强度为800~8000lx、温度20~25℃、湿度为75%~90%的温室内,每天光照9~11小时,驯化20~25天,~~10天,当苗高2~6厘米,根长1~。(4)移栽取出(3)中经过炼苗的幼苗,洗净根上残留的生根培养基,用浓度为100ppm的生根粉浸泡处理幼苗根部,移入装有营养土的移栽容器中,移栽前浇足1/10MS基本培养基溶液,上覆盖塑料薄膜,保持湿度在70%~100%;7天后逐渐通风,15天后揭膜,在此期间喷洒1/10MS基本培养基溶液,继续在光照强度为800~8000lx、温度20~25℃、湿度为70%~90%的温室内,培养20~50天,在苗高5~15厘米,有8~15片叶时移栽入大田。本发明的优选芽生长培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成白砂糖20~~7g6-(苄***基)~~~7g6-(苄***基)~~~~--7g吲哚-3-~~~7g吲哚乙酸1~3mg本发明的最佳芽生长培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成白砂糖30g琼脂粉6g6-(苄***基)-(苄***基)-3-,并在自然光下长苗、长根、炼苗同步进行的组织培养方法,组培步骤采用了适合于马哈利樱桃砧木快速繁殖的增殖培养基和生根培养基,增殖和生根效果好,使马哈利樱桃砧木生根率达85%以上,而且根系粗壮整齐,同时组培苗生长健壮,叶色浓绿,有效地节约了人力和物力,%,为工厂化生产奠定了基础。本发明组培方法具有简便易行、简化了程序、提高了工效、降低了成本等优点,可用于马哈利樱桃砧木的快速繁殖。具体实施例方式下面结合实施例对本发明进一步详细说明,但本发明不限于这些实施例。实施例1(1)组培苗的制备原材料的预处理剪取大田栽培的盛果期优良单株的无病虫害的健壮营养枝,切取其幼芽,流水冲洗干净,用干净滤纸吸干;材料消毒在超净工作台上将冲洗干净的幼芽在70%酒精中浸泡10~30秒,无菌水冲洗3次,每次5分钟,%HgCl2溶液中灭菌6~8分钟,用无菌水冲洗幼芽3~5次,每次5分钟,最后用无菌滤纸吸干,作为外植体扦插入1/2MS基本培养基中使芽生长,每隔3~5天将芽转接入新的1/2MS基本培养基中,重复2~3次,待培养基不再变色时,将芽转接入芽生长培养基中。本实施例所用的芽生长培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成白砂糖30g琼脂粉6g6-(苄***基)~3cm,有3~5片真叶时,将苗转入增殖培养基中进行快速繁殖。本实施例所用的增殖培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成白砂糖30g琼脂粉6g6-(苄***基),每瓶装25~35毫升,盖好瓶盖,~,将增殖生长的丛生芽分离成单个芽接入培养瓶中,其中生长较快的苗在转接时可切成带1~2个芽的茎段扦插于增殖培养基上,将培养瓶置于光照强度为3500~4500lx、每天照射10~12小时、温度为20℃~30℃、湿度为70%~90%的培养室中培养,每一次继代培养使用新鲜配置的增殖培养基,继代培养条件与第一代培养条件相同。选取繁殖8~~~3cm的带顶芽的上部茎段为材料进行生根培养。实验结果表明6-(苄***基)嘌呤和吲哚乙酸可使苗生长健壮整齐,。赤霉素可使苗生长迅速整齐,苗健壮,叶色浓绿,。酪蛋白有利于苗生长整齐健壮。(2)组培苗生根培养将(1)中切好的组培苗或茎段放入生根培养基中进行生根培养,本实施例的生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成白砂糖30g琼脂粉5g吲哚-3-,每瓶25~35毫升,盖好瓶盖,~。培养瓶移入暗室中进行暗培养,暗室中温度为18℃~22℃,湿度为70%~90%。根据正交试验结果,暗培养对马哈利樱桃砧木的生根影响最大,赤霉素对发根率有较强的抑制作用。采用本实施例的生根培养基暗培养7天后进行自然光炼苗生根,%,且根系健壮,苗壮且生长整齐,符合工厂化生产的要求。(3)长苗炼苗培养将经过暗培养的培养瓶直接移入光照强度为800~8000lx、温度20~25℃、湿度为75%~90%的温室内,每天光照9~11小时,驯化20~25天,打开瓶盖,炼苗5~10天,~。当苗高2~6厘米,根长1~。(4)移栽取出(3)中经过炼苗的幼苗,洗净根上残留的生根培养基,用市销的浓度为100ppm的生根粉浸泡处理幼苗根部,移入装有营养上(蛭石∶腐殖土∶田园土=2∶1∶2)的移栽容器中,移栽容器可采用塑料钵或育苗盘或苗床,移栽前浇足1/10MS基本培养基溶液,上覆盖塑料薄膜,保持湿度在70%~100%,7天后逐渐通风,15天后揭膜,在此期间喷洒1/10MS基本培养基溶液,继续在光照强度为800~8000lx、温度20~25℃、湿度为70%~90%的温室内,培养20~50天,在苗高5~15厘米,有8~15片叶时移栽入大田。实验结果表明用浓度为100ppm的生根粉浸泡处理幼苗根部,移栽成活率达到87%以上,%,前期生长良好,后期生长缓慢、长势差,因此,需在缓苗后生长一段时间进行2次移栽。%,移栽初期部分叶缘干枯,对成活有一定影响,但后期生长健壮、长势良好,不需要二次移栽,有利于快繁成苗,简化了繁殖步骤。实施例2在本实施例组培苗的培养步骤中,所用的芽生长培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成白砂糖15g琼脂粉4g6-(苄***基),所用的增殖培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成白砂糖15g琼脂粉4g6-(苄***基),所用的生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成白砂糖15g琼脂粉4g吲哚-3-。实施例3在本实施例组培苗的培养步骤中,所用的芽生长培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成白砂糖80g琼脂粉10g6-(苄***基),所用的增殖培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成白砂糖80g琼脂粉10g6-(苄***基),所用的生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成白砂糖80g琼脂粉10g吲哚-3-。实施例4在以上实施例1~3组培苗生根培养步骤中,所用的生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成白砂糖30g琼脂粉5g吲哚乙酸2mg在本实施例中所用的芽生长培养基和增殖培养基与相应的实施例相同。其它培养步骤与实施例1相同。%。实施例5在以上实施例1~3组培苗生根培养步骤中,所用的生根培养基为在1升1/。其它培养步骤与实施例1相同。实施例6在以上实施例1~3组培苗生根培养步骤中,所用的生根培养基为在1升1/。其它培养步骤与实施例1相同。为了证明本发明的有益效果,发明人采用了本发明实施例1方法以及培养过程中所用的芽生长培养基、增殖培养基、生根培养基,进行了实验室实验,各种实验情况如下实验材料马哈利樱桃砧木枝条、MS基本培养基、1/2MS基本培养基、吲哚乙酸、吲哚-3-丁酸、酪蛋白、6-(苄***基)嘌呤、生根粉、琼脂粉、白砂糖。材料提供单位马哈利樱桃砧木枝条由杨凌中富绿色硅谷有限公司提供,MS基本培养基和1/2MS基本培养基按照《植物组织培养》一书MS基本培养基配方由陕西师范大学生命科学院中药材组培快繁实验室配制,吲哚-3-丁酸、吲哚乙酸和6-(苄***基)嘌呤由中国医药(集团)上海化学试剂公司生产,生根粉、酪蛋白和琼脂粉由北京奥博星生物技术责任有限公司生产,白砂糖市售。实验仪器超净工作台、培养瓶。实验方法与实验结果1、6-(苄***基)嘌呤对芽成活及生长的影响本试验是将健壮的幼芽灭菌消毒后接种于含不同浓度6-(苄***基)嘌呤的MS基本培养基上,1周后检查芽的成活率,实验结果见表1。表16-(苄***基)嘌呤对芽成活及生长的影响表6-BA(mg/L)接种芽数成活芽数成活率(%)-(苄***基),芽不仅成活率高,而且生长健壮,叶色浓绿,无畸形苗。当6-(苄***基),苗愈伤化随激素浓度的增加愈伤化严重,幼苗生长畸形率增加。2、激素对芽增殖的影响(1)6-(苄***基)嘌呤对芽增殖的影响在MS基本培养基中加入不同浓度的6-(苄***基)嘌呤进行芽增殖培养,实验结果见表2。表26-(苄***基)嘌呤对芽增殖的影响表6-BA(mg/L)++++++++++++实验结论在6-(苄***基)嘌呤浓度较低时,芽生长健壮,,苗整齐,叶色浓绿。,但有少量愈伤组织出现,不利于生根,,虽然芽增殖数量较大,但是芽弱小,无法用于下一次增殖用,而且愈伤组织大量产生,不利于生根。-(苄***基)嘌呤用于芽增殖的最佳浓度。(2)6-(苄***基)嘌呤与吲哚乙酸配合使用对芽增殖的影响在