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建立表1菌株的DNA模板库用于以下实施例试验按传统的培养方法分别增菌培养表l中的菌株。取参考菌株的细菌培养液lmL,采用细菌DNA提取试剂盒(TakaRaMiniBESTBacterialGenomicDNAExtractionkit)提取细菌DNA,保存于-20'C备用以待检测。使用前,取表l中所列试验菌种,经培养后分别提取基因组DNA,建立模板库。弧菌接种于3XNaCl营养肉汤中(37士i:rC培养1824h,弯曲菌属的菌株在布氏肉汤中,于42"微需氧环境下培养(5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气)24h。其他的菌株在胰蛋白胨大豆肉汤中,于37。C培养24h。②PCR扩增取lul待测样品DNA溶液,加入10ul试剂盒检测溶液和14ul灭菌超纯水,总体积25ul;,混匀,5000r/min离心10s,然后按下列参数进行PCR循环预变性94°C,3min;进入循环94。C变性60s,6(TC退火60s,72'C延伸60s,35次循环;终止延伸72°C,7min;③DHPLC分析色谱柱PS-DVB&C18DNASep色谱柱,,粒度3柱温61°C;流动相(体积比),%缓冲溶液A,%缓冲溶液B;,48,7%缓冲溶液A,%缓冲溶液B;,%缓冲溶液A,%缓冲溶液B;其中,;***按体积比3:1的混合溶液;;检测器荧光检测器,光源150WXenon灯;激发谱带宽15nm;;检测灵敏度在波长350nm积分2s;上样量PCR产物5lLlL。实施例2、特异性试验(1)以标准李斯特菌为检测原料,按照实施例1所建立的试剂盒及方法对六种菌进行检测,检测结果如附图17所示。李斯特氏菌引物在6rc部分变性的检测结果图谱。由图i可见,单增李氏菌、绵羊李氏菌、英诺克李氏菌、西尔李氏菌、威尔李氏菌、格式李氏菌均达到了部分变性的差异检测效果。6种菌在6rc部分变性条件下,从各自差异基因位点不同程度地解链,随着片段的解链域不同,各自核苷酸片段在TEAA分子中的三个乙基与固定相C18表面的垸基发生疏水作用力相互吸引,通过流动相中的乙***的梯度洗脱达到将不同性质的6种菌种核苷酸片段分子的分离,因而各自出现了特异性的分离图谱,可以很明显地从检测图谱上将6种菌种区分开来。如图l-A所示,;如图l-B所示,;如图1-C所示,;如图l-D所示,;如图l-E所示,;如图1-F所示,。且各种李斯特氏菌株的吸收峰型具有明显差异,可以清楚区分。图