文档介绍：该【实验8 考马斯亮蓝染色显示细胞骨架 】是由【小可爱】上传分享，文档一共【16】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【实验8 考马斯亮蓝染色显示细胞骨架 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。实验8考马斯亮蓝染色显示细胞骨架细胞骨架的概念为真核细胞胞质中的蛋白质构成的纤维系统,在细胞的形态维持、细胞的运动、物质运输和细胞分裂中发挥重要作用。三种组成成分:微丝、微管、中等纤维非肌细胞中的微丝是动态结构,肌动蛋白单体(G-actin)与纤维(F-actin)在一定条件下互相转化。本实验中M-缓冲液提供的离子条件可使F-actin稳定。二、实验原理**中等纤维微管微丝**二、实验原理考马斯亮蓝R250(CoomassieblueR250)是一种蛋白质染料,不能特异地显示细胞骨架蛋白。用含非离子型去垢剂TritonX-100的缓冲液处理细胞,可将细胞的膜结构和部分蛋白质抽提掉,但细胞骨架系统的蛋白质却被保留,用考马斯亮蓝R250染色后,在光学显微镜下可见一种网状结构,其主要成分为直径40nm左右的微丝束。观察时可能会发现细胞膜上有些孔洞,甚至有些细胞变空了,这可能是由于TritonX-100处理时间过久破坏细胞结构所致。**培养的成纤维细胞用Coomassieblue染色的结果**显示细胞骨架成分的特异性方法1、特异性的药物结合反应:如罗丹明标记的鬼笔环肽,可以显示微丝2、免疫细胞化学方法:制备细胞骨架蛋白的特异性抗体,用免疫荧光、免疫酶标的方法显示细胞骨架**免疫荧光染色左:微丝,中:微管,右:中等纤维**三、实验用品复式显微镜(带油浸物镜)擦镜纸(lenspaper);记号笔;小片滤纸;载玻片;盖玻片;剪刀;镊子;洋葱鳞茎①1%TritonX-100;②M缓冲液;③3%戊二醛;④;⑤%考马斯亮蓝R-250染色液**四、,剪成约1cm见方。,使其下沉(每人做2片,不要太大,否则不易展开)。,用1%TritonX-100处理20mins。对照组使用M缓冲液处理。%戊二醛固定30min(或Carnoy固定液)。%考马斯亮蓝染色30mins,蒸馏水冲液洗一次,5分钟。然后将表皮(带少量液体)平铺在载玻片上,加盖玻片,显微镜下观察。**注意事项洋葱鳞茎内表皮不必剪得过大,否则很难平整地铺开在载玻片上,而是部分重叠着,影响观察效果。另外,在用高倍镜观察之前要盖上盖玻片,如果载玻片上较干,最好先滴上一滴水后再盖盖玻片,以免造成很多气泡,影响观察效果。染色时间不宜过长,否则会染色过甚反而观察效果不佳。用1%TritonX-100抽提杂蛋白的时间要控制好,时间长将破坏细胞结构,抽提时间短背景干扰大,影响观察效果。**