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。实验室采用实时荧光定量PCR技术作为临床基因诊断的主要手段,实验室分为试剂准备区、标本制备区和扩增及产物分析区三个独立实验室,连接部位设置一个缓冲区,用于更换工作服、鞋套等;每一工作区各配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服,并有明显的区分标识。进入各个工作区域进行基因工作扩增时,必须严格遵守单一方向顺序,即从第一区试剂贮存及准备区→第二区的标本制备区→第三区的扩增区。、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等,不可混用。,一区为蓝色,二区为粉红色,三区为白色。进入实验室,必须更换本室有颜色标识的工作服,穿上一次性鞋套。 ,三,五才开展项目,为避免频繁进入标本制备间,标本的接收在标本收集间进行,收集后暂放于储存标本的专用冰箱。,验收登记后,将标本送入标本制备区。出去后当天不得再进入实验室。,应书写工整详细,使用本室专用的、带有本室标识的记录本、纸和笔。 。实验中须戴手套、一次性鞋套。、湿度计读数。,绘制冰箱的质控图(附图02)。,取出当天实验须配制和使用的试剂,其余试剂要立即收好放回冰箱内。,看有无过期或将近到期的试剂,或作报废处理或排列优先使用,避免浪费,然后记录试剂的详细保存情况。。xxx医院PCR实验室程序管理文件及标准化操作程序编号:XJNESYQYY--JYK日期:2011年12月10日版本:2011—14责任部门:第页,共53页编写人批准人生效日期xxxxxx2011年12月10日(4),书写工整详细,应使用本室专用的、带有本室标识的记录本、纸和笔。~60分钟,记录紫外灯使用情况。 。实验中须使用一次性鞋套,戴手套,手套需常更换。。。,打开紫外灯消毒15~30分钟。、湿度计读数。,绘制冰箱的质控图。、类型和标本数量。,在工作台面上进行加样,加样后高速15000rpm离心数秒后,将其放入传递盒。。、吸头须置于盛有4%“84”消毒液的废液缸中。、纸和笔。。,收拾台面,用4%的84消毒液全面擦试生物安全柜内的工作台面,开紫外灯消毒30分钟。,记录仪器使用时间和运行状态。~60分钟,记录紫外灯使用情况。 。实验中须使用一次性鞋套,戴手套,手套需常更换。。。,记录结果,打印报告。,在室内质控图(附图03)上描点。,将扩增过的反应管小心地取出放入密封的塑料袋里丢入医疗垃圾袋中,记录仪器使用时间和运行状态。~60分钟,记录紫外灯使用情况。本文涉及以下图表,见SOP文件末的附图表:实验室平面布局示意图---附图01冰箱质控图---附图02xxx医院PCR实验室程序管理文件及标准化操作程序编号:XJNESYQYY--JYK日期:2011年12月10日版本:2011—15责任部门:第页,共53页编写人批准人生效日期xxxxxx2011年12月10日(5)室内质控图---附图03实验室人员配置及培训程序目的:保证实验室有足够数量的合格的工作人员,并能完成相应的工作任务。适用范围:本程序适用于实验室人员配置、管理、培训及考核。程序::,具有大专以上学历。,并取得合格证。,如尚未取得PCR技术培训合格证,应在实验室有培训合格证的上级技术人员的指导下进行实验工作,实验报告由有资格人员出具,并应在最短的时间内取得上岗培训合格证。:,目前实验室有副主任技师1人、主管技师1人,初级技师2人,获得培训合格证者2人,视工作量的增加和业务发展需要,应适当增加工作人员。、监督质量、实验室所有工作人员在条件许可时,应在最短时间内获得上岗培训合格证书。工作人员上岗前必须学****掌握PCR实验室管理文件及要求,并由实验室主任核查。实验室主任具体负责实施技术培训、考核及管理。、技术指导、解决与临床沟通及技术疑难问题。实验室主任不在岗时,应指定临时负责人。:(或委托人)参加每年卫生部PCR室间质评总结会。~2年至少参加1次PCR技术的省级或国家级继续教育项目,参加相关学术交流会议。。。,包括:学历、任职资格、发表论文、研究成果、培训等相关材料复印件(检验科统一管理)。引用表格:1实验室工作人员一览表(附表02);2人员培训计划及培训记录表(附表05)。xxx医院PCR实验室程序管理文件及标准化操作程序编号:XJNESYQYY--JYK日期:2011年12月10日版本:2011—16责任部门:第页,共53页编写人批准人生效日期xxxxxx2011年12月10日(6)仪器申请、采购、安装和管理程序1 目的:保证仪器正常的购买、安装、使用,确保实验室仪器设备得到妥善的管理。2 适用范围:基因扩增检验实验室所有的仪器设备。3 申请、。,通过科室领导小组会议批准后,上报医院设备科统一进行购买。,在医院设备科人员和实验室人员共同陪同下由厂家到实验室进行安装。,填报仪器安装表后,设备科和实验室各备份一份仪器维护使用档案后,由实验室负责人签字后方可使用。4管理程序:,主要的仪器包括:XXXXX扩增仪、高速离心机、普通低温冰箱、移液器、超净工作台、生物安全柜等。:设备名称、制造商名称、型号、序号、接收日期和启用日期、目前放置地点、接收时的状态、校准和鉴定的日期和结果以及下次校准的日期、进行的维护和维护计划、故障记录等,并应有仪器使用说明书或其它技术资料复印件。,如不能正常使用,应填写维修申请单,交医院设备维修人员或相关专门维修单位进行处理。,正常使用者贴绿色标签。有故障待修暂停使用者用黄色标签,不能使用者应贴红色标签。需定期作校准或检定的仪器应有校准或检定日期及下次校准或检定日期的记录。,由科有关人员统一处理。,不得混用。、设备均为专用不外借。本文涉及以下表格,见SOP文件末的附图表:主要仪器设备一览表(附表03)。设备校正记录表(附表08)。xxx医院PCR实验室程序管理文件及标准化操作程序编号:XJNESYQYY--JYK日期:2011年12月10日版本:2011—17责任部门:第页,共53页编写人批准人生效日期xxxxxx2011年12月10日(7)实验室试剂、耗材购买管理程序目的:规定试剂购买原则、验收的程序和试剂的正确贮存。范围:适用于本实验室所购的诊断试剂盒、实验耗材。职责:本程序由科主任落实,室负责人主管协助。工作程序::试剂的购买须根据科内的有关规定本着“质优价廉”进行,所购基因诊断试剂必须三证齐全(生产许可证、产品注册证、经营许可证),并与荧光定量扩增仪相配套。:①试剂厂家的确定:先由具体项目操作人员提出初步意见,提供2家或2家以上(特殊情况1家亦可)试剂厂家的有关试剂信息(包括试剂厂家的信息广告、同行对有关试剂盒的使用评价和有关机构的综合评价),提交科试剂审核小组讨论决定第一试剂商和第二试剂供货商,并与供货商商谈试剂价格;②试剂的购买:具体项目操作人员每月底提出所购试剂的品种和数量,由实验室负责人或委托人与供货商联系供货;③试剂厂商的变更:为保证试剂使用的稳定性,原则内一年内不变更试剂厂商,如在使用过程中发现质量问题,由室负责人向科主任提出申请,交试剂审核小组讨论决定。:供货商送来试剂后由科专门人员和项目操作人员共同验收,在厂家的供货清单上签字,项目操作人员负责试剂质量验收(内外包装),科专门人员核对试剂的数量和价格,供货清单交室负责人保管;试剂验收后登记。:试剂登记后,及时放入试剂贮备区的冰箱,保存条件按说明书规定进行。:按试剂质检SOP进行。:由实验室负责人填写申请,按需提出所购耗材的品名、规格、数量,由科主任签字同意后交科室指定人员送交院设备科购买。:消耗品购进后由科专门人员验收、领进检验科,交实验室人员,实验室人员核对数量、规格,查验外包装是否破损,如发生破损,给予退回。:消耗品按要求存入各区指定位置。(不足2周使用时),应向室负责人提出,以便及时购买;使用过程中发现试剂有质量问题时向室负责人提出,由室负责人核实后采取措施。引用的文件及表格xxx医院PCR实验室程序管理文件及标准化操作程序编号:XJNESYQYY--JYK日期:2011年12月10日版本:2011—18责任部门:第页,共53页编写人批准人生效日期xxxxxx2011年12月10日(8)试剂的质检标准操作程序试剂验收记录表(附表11)试剂的质检标准操作程序1 目的:保证每批用于临床实验的试剂的质量良好,符合。2 适用范围:各种用于临床实验的核酸扩增荧光检测试剂(现包括HBV、HCV、TB、CT、UU)3 收到试剂后,目测试剂是否处在冻存状态。:外包装(厂名厂址、检测项目、批准文号批号和有效期等);内包装(试剂瓶完整性、真空包装完整性、试剂品种完整性、使用说明书有否等)。 及时将试剂转入冷冻冰箱保存。将上述检测核对情况在记录本上登记。 最迟在前批次试剂存量尚可维持常规实验一周时,按如下要求对新批号试剂进行效验实验。 效验实验要求设置:空白对照、阴性对照,阳性标准品梯度(104、103、106、107)。 出现如下情况中任何一种的,判断为试剂不合格,不能用于临床检测:a)空白对照出现扩增(出现阳性结果)。需重复实验确证试剂污染。b)阳性对照和阳性标准品均未检出(阴性),或阳性对照未检出而阳性标准品检出率大幅下降,表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。,阳性标准品检测正常,提示样品提取液可能存在问题。重复新旧提取液阳性对照实验,确定提取液失效问题。更换提取液后该批试剂方可使用。,阴性对照有扩增,排除其他污染可能性后,提取液存在污染可能。单独用提取液点样上机,出现扩增,需更换提取液后方可使用该批试剂。,阳性标准品未检出,提示阳性标准品存在问题。更换阳性标准品后该批试剂方可投入使用。、阴性对照无扩增,阳性对照正常检出,阳性标准品导出的标准曲线均在使用范围内,表明该批试剂良好,可以投入临床使用。。xxx医院PCR实验室程序管理文件及标准化操作程序编号:XJNESYQYY--JYK日期:2011年12月10日版本:2011—19责任部门:第页,共53页编写人批准人生效日期xxxxxx2011年12月10日(9):保证耗材的使用质量不会影响检测工作的正常进行。2. 适用范围:核酸扩增荧光检测实验室常用耗材:、、带滤芯的吸头。3、 :检查离心管有无畸形、破损、不能闭盖的情况。(每批随机抽样离心管50个用于实验检测)。,置于沸水浴锅中20分钟后取出,如发现有爆开情况发生,即认为该批离心管不符合本实验室实验要求,作退货处理。,1万转/分离心20分钟,如发现有管盖爆开或漏液情况发生,即认为该批离心管不符合本实验室实验要求,作退货处理。,即启用该批耗材。 、步骤同上。 、破损的情况,如无以上情况则做以下质检。:配制1%-2%***橙的水溶液,如果吸头的最大体积为100ul,则将加样器吸取体积调至110~120ul(如果吸头的最大体积为200ul,则将加样器吸取体积调至210~220ul;如果吸头的最大体积为10ul,则将加样器吸取体积调至11~12ul),再套紧吸头,吸取***橙溶液,如滤心中有***橙溶液透过,表示滤心漏气,不能用于PCR检测,作退货处理。如果滤心中无***橙透过,则再检测10个吸头,假若都未发现滤心漏气现象即可启用该批吸头。、是否能有效防止气溶胶污染的检验:先纯化制备3份强阳性和10份阴性核酸标本,然后使用待评价带滤心吸头对强阳性样本来回吸取10次(模拟10份阳性样本的吸取),将最后一次的吸取液加至一含扩增反应液的管中,之后,换一个新吸头,连续吸取10份阴性样本分别至10个扩增反应管中,此过程重复3~5次,最后对每一管按所用试剂方法进行扩增检测。强阳性样本如为强阳性,则可启用该批吸头;如出现阳性弱或出现阴性则说明吸头可能含有扩增抑制物,不能用于PCR检测,作退货处理。所有阴性样本如为阴性,则可启用该批吸头;如出现阳性则表明吸头不能有效地防止气溶胶对加样器的污染,不能用于PCR检测,作退货处理。备注:实验耗材在目测合格后基本上都可以初步通过验收。如果在目测不合格或目测合格后出现甚至频繁出现爆管、堵塞、漏液、漏气等情况下,再由实验人员进行实验检测。xxx医院PCR实验室程序管理文件及标准化操作程序编号:XJNESYQYY--JYK日期:2011年12月10日版本:2011—111责任部门:第页,共53页编写人批准人生效日期xxxxxx2011年12月10日(11)