文档介绍：该【消毒剂消毒效果验证方案 】是由【1781111****】上传分享，文档一共【23】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【消毒剂消毒效果验证方案 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。:..1、验证方案的起草起草人部门日期2、验证方案的审批审核人部门日期3、验证方案的批准批准人批准日期:..、再验证周期22:..,用于控制生产环境、设备表面等的微生物污染的一种化学剂。由于没有一种消毒剂是完全理想的,因此有必要在实际工作中使用两种以上的消毒剂。交替使用在理论上有利于防止形成相同环境的分离菌或抑制细菌的适应性。本实验方案针对①75%乙醇、②1%新洁尔灭、③3%甲酚皂杀菌剂、④3%的过氧化氢溶液共4种消毒剂进行抑制或者杀灭微生物的效果确认。,来评价消毒剂对微生物的杀灭效果。%乙醇、1%新洁尔灭、3%甲酚皂溶液、3%:本验证先在实验室对所使用的消毒剂,用六种控制菌做生物指示剂挑战性实验;然后做现场消毒考察实验,即现场消毒后用棉签取样法对消毒后的表面取样,做表面残留微生物限度检查。通过对指示菌的杀灭对数值和现场消毒后洁净区表面微生物的残留限度来确认消毒剂的消毒效果。:(1)细菌:金黄色葡萄球菌(6538)铜绿假单胞菌(15442)22:..大肠杆菌(25922)伤寒杆菌(6539)(2)细菌芽孢:枯草杆菌芽孢(9372)(3)真菌:白色念珠菌(10231)(TSA)、营养肉汤培养基。:1%蛋白胨-.4中和剂:%卵磷脂+1%吐温80溶液;%硫代硫酸钠(3%过氧化氢)(90mm):75%乙醇、1%新洁尔灭、3%甲酚皂溶液、3%:0-100ul,100-①中和剂效力及毒性试验目的在化学消毒试验中,达到规定消毒时间终点时,要求立即终止残留消毒剂的继续作用,以便准确检测出消毒体系中残留存活的微生物及其数量。因为消毒体系中残留的消毒剂,可能对微生物的生长繁殖具有一定抑制作用,从而可导致对杀菌效果偏高的错误判断,甚至产生假阴性结果。残留消毒剂的去除,可排除残留消毒剂对微生物的抑制,从而使试验获得正确结果。中和法是指在消毒剂与微生物作用到达规定时间的终点时,取样加于适宜种类和浓度的中和剂中,将残留消毒剂迅速中和,使其不再持续抑制或杀灭微生物的方法。本试验中所使用的中和剂必须既能有效抑制消毒剂的杀菌性(中和剂的效力试验)同时又不削弱微生物活力的恢复(中和剂的毒性试验)。②中和剂效力、毒性确认用稀释剂将试验菌制成5×105~5×106cfu/ml的的菌悬液备用。准备无菌试管6支,按表一试验操作步骤表分组进行操作。各组试昝充分震荡放置于振荡器震荡至少20秒或在手掌上振敲80次,然后移取Iml混合液到平皿中做平皿计数,轻轻转动平皿以使菌落在培养基表面均匀分散开来,每组做两皿平皿,并做好标记。平皿在层流台下吹干,倒置于37℃下培养48小时后计数。具体结果见附件一中和剂中22:..和效力评估测试记录22:..表一中和剂效力、+,吸取1ml最终作用液于平皿中,做活菌计数。灭或抑制能力。B组菌落数比C、D、E组少,+:A组平均菌落数B组平均菌落数剂试管中混匀,吸取1ml最终作用液于平皿中,做活菌计数。到消毒剂作用后的试验菌是0>5否能恢复生长。X(1~10)>X+5Y(>10)>Y++。和剂试管中混匀,吸取1ml最终作用液于平皿中,做活菌计数。+,或未被完全中和剂试管中混匀,吸取1ml最终作用液于平皿中,做活菌计数。中和的残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。+,吸取1ml最终作用液于平皿中,做活菌计数。%***化钠溶液于平皿中做活菌计数。作阴性对照应无菌落生长备注若菌落太多不能计数,则移取1ml上述混合物,到9ml灭菌注射的生理盐水中(稀释10倍),充分振荡后再移取1ml做平皿计数。试验结果符合上述所有条件,所测中和剂才可判为合格。:..(定量悬浮试验)。,作用一定时间。去除残留的消毒剂影响后,以上液定量接种于营养琼脂平板上。经培养后计算其菌落数。与未经消毒剂作用的对照菌液平板计数相比较,计算出杀菌效率。:10用9ml的稀释剂稀释5次,计数培养,大约70-80之间,以获得10-4-10-6数量级的菌悬液。将最终稀释的10-4、10-5、10-6三个数量级,即三个稀释梯度的菌悬液,各取2份1ml均匀接种涂布在培养基平板上进行培养计数。将涂布的6块平板在37℃进行培养,7天后进行读数,以确认稀释浓度。:+,作用10min,,,吸取1ml最终作用液于平皿中,做活菌计数。白色念珠菌23~28℃培养72h后计数,其它菌液30~35℃培养48h后计数。(a,a),a和a1的平均值都应处于30-300CFU之间。:用稀释剂代替消毒剂,进行平行试验,作为阳性对照。计算每一种挑战菌种的Log下降值,并记下消毒剂的浓度和各自的接触时间。(KL)=对照组平均活菌浓度对数值-≥3判为合格。,如果计算结果符合接受标准,即在一定的接触时间内,%(下降3个对数单位),:..分装机台面为保证消毒剂的效果,消毒前试消毒前、后,同一平面验应在洁净室及设备运行之后,分装间墙面不同采样点分别进行3人员活动频繁,设备及洁净室墙次面等最脏的时候进行消毒前的分装间地面采样。(1)随机取物体表而(设备表面、台面、门等),用规格板标定2块面积各为25cm2的区块,一供消毒前采样,一供消毒后采样。(2)消毒前,将无菌棉拭于含5ml中和剂试管中沾湿,对一区块涂抹采样,横竖往返各8次。采样后,将棉拭采样端剪入原中和剂试管内,漩涡混合仪震荡20s或振打80次,作为消毒前样本。(3)将配置好的消毒剂喷雾或涂擦于物体表面,保持湿润10分钟进行消毒。消毒后,将无菌棉签拭于中和剂试管中沾湿,并于试管壁上挤干后,对消毒区块涂抹采样,横竖往返各8次。采样后,以无菌操作方式将棉签拭采样端剪入原中和剂试管内,漩涡混合仪震荡20s或振打80次,作为消毒组样本。擦拭法取样示意图(4)试验结束后,,作为阴性对照组样本。,以琼脂倾注法接种平皿,每个样本接种2个平皿,放37℃恒温箱中培养48h,观察最终结果。(5)计算杀灭对数值。杀灭对数值N=lg消毒前平均菌落数-lg消毒后平均菌落数。(6)判定标准消毒剂杀灭对数值≥3判为合格。(7)结论22:..根据实验结果进行计算,如果计算结果符合接受标准,即在一定的接触时间内,%(下降3个对数单位),,应严格按照消毒标准操作程序进行操作。,并经过调查分析和处理。、试验结果记录,根据验证、试验结果起草验证报告,报验证领导小组核对。验证领导小组对验证结果进行综合评审,做出验证结论,发放验证证书,确认该再验证周期。对验证结果的评审应包括:。,修改原因、依据以及是否经过批准。。,偏差及对偏差的说明是否合理,是否需要进一步补充试验。6、。,应重新评估目前使用的消毒剂,必要时更换消毒剂的品种以及调整消毒剂的使用周期。新消毒剂使用前均需经效果验证后方可使用。22:..,中和剂鉴定试验结果菌落计数结果(CFU/ml)75%乙醇溶液1%新洁尔灭溶液3%甲酚皂溶液3%的过氧化氢溶液序号项目类型中和剂:1%卵磷脂+%中和剂:1%卵磷脂中和剂:1%卵磷脂中和剂:%硫代硫酸钠聚山梨酯80+%聚山梨酯80+%聚山梨酯80(消毒剂+工作菌1液)+稀释液(消毒剂+工作菌液)+2中和剂3中和剂+工作菌液(消毒剂+中和剂)+工4作菌液5阳性对照组第3、4、5组间误差6率第1组无菌生长,或仅有少数试验菌菌落生长;第2组菌落数比第1组菌落数多,但比第3、4、5组菌落数少;可接受标准第3、4、5组有相似菌落数生长,其每组间菌落数是误差率不超过15%;阴性对照组应无菌生长。结论符合规定11:..工作菌液大肠埃希菌为时,中和剂鉴定试验结果菌落计数结果(CFU/ml)75%乙醇溶液1%新洁尔灭溶液3%甲酚皂溶液3%的过氧化氢溶液序号项目类型中和剂:1%卵磷脂+%中和剂:1%卵磷脂中和剂:1%卵磷脂中和剂:%硫代硫酸钠聚山梨酯80+%聚山梨酯80+%聚山梨酯80(消毒剂+工作菌1液)+稀释液(消毒剂+工作菌液)+2中和剂3中和剂+工作菌液(消毒剂+中和剂)+工4作菌液5阳性对照组第3、4、5组间误差6率第1组无菌生长,或仅有少数试验菌菌落生长;第2组菌落数比第1组菌落数多,但比第3、4、5组菌落数少;可接受标准第3、4、5组有相似菌落数生长,其每组间菌落数是误差率不超过15%;阴性对照组应无菌生长。结论符合规定22:..,中和剂鉴定试验结果菌落计数结果(CFU/ml)75%乙醇溶液1%新洁尔灭溶液3%甲酚皂溶液3%的过氧化氢溶液序号项目类型中和剂:1%卵磷脂+%中和剂:1%卵磷脂中和剂:1%卵磷脂中和剂:%硫代硫酸钠聚山梨酯80+%聚山梨酯80+%聚山梨酯80(消毒剂+工作菌1液)+稀释液(消毒剂+工作菌液)+2中和剂3中和剂+工作菌液(消毒剂+中和剂)+工4作菌液5阳性对照组第3、4、5组间误差6率第1组无菌生长,或仅有少数试验菌菌落生长;第2组菌落数比第1组菌落数多,但比第3、4、5组菌落数少;可接受标准第3、4、5组有相似菌落数生长,其每组间菌落数是误差率不超过15%;阴性对照组应无菌生长。结论符合规定22:..工作菌液为伤寒杆菌时,中和剂鉴定试验结果菌落计数结果(CFU/ml)75%乙醇溶液1%新洁尔灭溶液3%甲酚皂溶液3%的过氧化氢溶液序号项目类型中和剂:1%卵磷脂+%中和剂:1%卵磷脂中和剂:1%卵磷脂中和剂:%硫代硫酸钠聚山梨酯80+%聚山梨酯80+%聚山梨酯80(消毒剂+工作菌1液)+稀释液(消毒剂+工作菌液)+2中和剂3中和剂+工作菌液(消毒剂+中和剂)+工4作菌液5阳性对照组第3、4、5组间误差6率第1组无菌生长,或仅有少数试验菌菌落生长;第2组菌落数比第1组菌落数多,但比第3、4、5组菌落数少;可接受标准第3、4、5组有相似菌落数生长,其每组间菌落数是误差率不超过15%;阴性对照组应无菌生长。结论符合规定22:..工作菌液为枯草芽孢杆菌时,中和剂鉴定试验结果菌落计数结果(CFU/ml)75%乙醇溶液1%新洁尔灭溶液3%甲酚皂溶液3%的过氧化氢溶液序号项目类型中和剂:1%卵磷脂+%中和剂:1%卵磷脂中和剂:1%卵磷脂中和剂:%硫代硫酸钠聚山梨酯80+%聚山梨酯80+%聚山梨酯80(消毒剂+工作菌1液)+稀释液(消毒剂+工作菌2液)+中和剂3中和剂+工作菌液(消毒剂+中和剂)+4工作菌液5阳性对照组第3、4、5组间误差6率第1组无菌生长,或仅有少数试验菌菌落生长;第2组菌落数比第1组菌落数多,但比第3、4、5组菌落数少;可接受标准第3、4、5组有相似菌落数生长,其每组间菌落数是误差率不超过15%;阴性对照组应无菌生长。结论符合规定22:..工作菌液白色念珠菌为时,中和剂鉴定试验结果菌落计数结果(CFU/ml)75%乙醇溶液1%新洁尔灭溶液3%甲酚皂溶液3%的过氧化氢溶液序号项目类型中和剂:1%卵磷脂+%中和剂:1%卵磷脂中和剂:1%卵磷脂中和剂:%硫代硫酸钠聚山梨酯80+%聚山梨酯80+%聚山梨酯80(消毒剂+工作菌1液)+稀释液(消毒剂+工作菌液)+2中和剂3中和剂+工作菌液(消毒剂+中和剂)+工4作菌液5阳性对照组第3、4、5组间误差6率第1组无菌生长,或仅有少数试验菌菌落生长;第2组菌落数比第1组菌落数多,但比第3、4、5组菌落数少;可接受标准第3、4、5组有相似菌落数生长,其每组间菌落数是误差率不超过15%;阴性对照组应无菌生长。结论符合规定22:..:金黄色葡萄球菌实验组第一次试验第二次试验第三次试验消毒剂平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿275%乙醇平均菌落数杀菌对数值1%新洁尔灭平均菌落数杀菌对数值3%甲酚皂平均菌落数杀菌对数值3%过氧化氢平均菌落数杀菌对数值阳性的对照平均菌落数22:..:大肠杆菌实验组第一次试验第二次试验第三次试验消毒剂平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿275%乙醇平均菌落数杀菌对数值1%新洁尔灭平均菌落数杀菌对数值3%甲酚皂平均菌落数杀菌对数值3%过氧化氢平均菌落数杀菌对数值阳性的对照平均菌落数22:..:铜绿假单胞菌实验组第一次试验第二次试验第三次试验消毒剂平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿275%乙醇平均菌落数杀菌对数值1%新洁尔灭平均菌落数杀菌对数值3%甲酚皂平均菌落数杀菌对数值3%过氧化氢平均菌落数杀菌对数值阳性的对照平均菌落数22:..:伤寒杆菌实验组第一次试验第二次试验第三次试验消毒剂平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿275%乙醇平均菌落数杀菌对数值1%新洁尔灭平均菌落数杀菌对数值3%甲酚皂平均菌落数杀菌对数值3%过氧化氢平均菌落数杀菌对数值阳性的对照平均菌落数22:..:枯草芽孢杆菌实验组第一次试验第二次试验第三次试验消毒剂平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿275%乙醇平均菌落数杀菌对数值1%新洁尔灭平均菌落数杀菌对数值3%甲酚皂平均菌落数杀菌对数值3%过氧化氢平均菌落数杀菌对数值阳性的对照平均菌落数22:..:白色念珠菌实验组第一次试验第二次试验第三次试验消毒剂平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿275%乙醇平均菌落数杀菌对数值1%新洁尔灭平均菌落数杀菌对数值3%甲酚皂平均菌落数杀菌对数值3%过氧化氢平均菌落数杀菌对数值阳性的对照平均菌落数22:..%新洁尔灭75%乙醇3%甲酚皂溶液3%的H2O222:..附件三现场消毒剂效力结果记录实验组内包间地面内包间墙面内包间操作台面消毒剂平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿275%乙醇消毒前平均菌落数消毒后平均菌落数杀菌对数值1%新洁尔灭消毒前平均菌落数消毒后平均菌落数杀菌对数值3%甲酚皂消毒前平均菌落数消毒后平均菌落数杀菌对数值3%过氧化氢消毒前平均菌落数消毒后平均菌落数杀菌对数值22