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标准溶液配制组***标准溶液(4mg/mL):称取适量组***参考物质(),,置于10mL容量瓶中,用水溶解并定容至刻度线,混匀,配成浓度为4mg/mL的组***标准溶液。在-20℃保存,有效期6个月。 注:组***标准溶液的配制浓度以组***单体计算,称取组***参考物质时应进行折算。组***参考物质:若为组***(CHN,),称取40mg;若为组***盐酸盐(CHN·2HCl,),称取59359366mg;若为组***磷酸盐(CHN·2HPO·HO,),称取117mg。 材料组***胶体金免疫层析试剂盒:含胶体金检测卡及配套的试剂。4 电子天平:。 pH计。 组织粉碎机。 涡漩混合器。 离心机:转速≥4000r/min。 移液器:100μL、200μL、1mL和5mL。 读数仪(可选):产品配套可使用的检测仪器。5 温度15℃~30℃。 空气相对湿度≤80%。6 试样制备去头、骨、内脏、鱼皮,取约100g肌肉,用组织粉碎机充分粉碎混匀,均分成两份,分别装入洁净容器作为试样和留样,密封,标记,于-20℃保存。 方法一(衍生测定法)称取试样2g±,加入10mL样品提取液(),涡漩或剧烈振荡3min,4000r/min离心3min,取30μL离心后的上清液,()、50μL样品衍生剂(),充分混匀后,室温下静置1min,即为样品处理液,按以下稀释操作,获取待测液:2:..犓犑202102高组***鱼类(指鲐鱼、鱼、竹荚鱼、鲭鱼、鲣鱼、金枪鱼、秋刀鱼、马鲛鱼、青占鱼、沙丁鱼等青皮红肉?海水鱼):取40μL样品处理液,(),混匀,即为待测液。其他海水鱼类:取40L样品处理液,(),混匀,即为待测液。 方法二(直接测定法)称取试样2g±,加入10mL样品提取液(),涡漩或剧烈振荡3min,4000r/min离心3min,上清液即为样品处理液,按以下稀释操作,获取待测液:高组***鱼类(指鲐鱼、鱼、竹荚鱼、鲭鱼、鲣鱼、金枪鱼、秋刀鱼、马鲛鱼、青占鱼、沙丁鱼等青皮红肉?海水鱼):取30?L样品处理液,(),混匀,即为待测液。其他海水鱼类:取60L样品处理液,(),混匀,即为待测液。μ 注:请根据所采用的检测卡选择对应的试样提取方法,试样提取可按照试剂盒说明书进行操作,不做限定。 测定步骤测试前,将未开封的检测卡恢复至室温。吸取60μL~120μL样品待测液于检测卡的加样孔中,室温温育5min~8min,直接进行结果判定。 注1:测定步骤建议按照试剂盒说明书。 注2:结果判定建议使用读数仪,读数仪的具体使用参照仪器使用说明书。 质控试验每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。 —2016《食品安全国家标准食品中生物***的测定》第一法液相色谱法检测不含组***的试样作空白试样。称取空白试样,。 加标质控试验称取空白试样2g±,加入100μL组***标准溶液(4mg/mL)(),使组***含量为400mg/kg(高组***鱼类)或200mg/kg(其他海水鱼类),。7 读数仪测定结果按读数仪说明书要求操作,直接读数并进行结果判定。 目视判定通过对比控制线(C线)和检测线(T线)的颜色深浅进行结果判定。目视判定示意图见图1。 无效控制线(C线)不显色,无论检测线(T线)是否显色,均表示实验结果无效。3:.. 阳性结果控制线(C线)显色,若检测线(T线)不显色或颜色浅于控制线(C线),表示试样中含有待测组分且其含量高于方法检出限,判为阳性。 阴性结果控制线(C线)显色,若检测线(T线)颜色深于或等于控制线(C线),表示试样中不含待测组分或其含量低于方法检出限,判为阴性。图1 质控试验要求空白试样测定结果应为阴性,加标质控样品测定结果应为阳性。8 结论当检测结果为阳性时,应对结果进行确证。9 检出限高组***鱼类400mg/kg,其他海水鱼类200mg/kg。 灵敏度灵敏度≥95%。 特异性特异性≥85%。 假阴性率假阴性率≤5%。 假阳性率假阳性率≤15%。 注:性能指标计算方法见附录A。4:..犓犑20210210 其他本方法分析步骤和结果判定可以根据厂家试剂盒的说明书进行,但应符合或优于本方法规定的性能指标。本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便,在使用本方法时不做限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前,须对其进行考察,应满足本方法规定的各项性能指标。—2016《食品安全国家标准食品中生物***的测定》第一法液相色谱法(包括所有的修改单)。第二法偶氮试剂法比色卡法11 原理样品中的组***经提取后,通过正戊醇萃取净化,再与偶氮试剂反应生成橙色化合物,其颜色的深浅在一定范围内与组***含量成正相关,通过色阶卡进行目视比色,对样品中组***进行定性判定。12 试剂与材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。 三***乙酸(CHClO)。 氢氧化钠(NaOH)。 正戊醇(CHO)。 盐酸(HCl,37%)。 碳酸钠(NaCO)。 对硝基苯***(CHNO)。 亚***钠(NaNO)。 三***乙酸溶液(100g/L):称取10g三***乙酸(),用水溶解并稀释至100mL,有效期6个月。 氢氧化钠溶液(250g/L):称取25g氢氧化钠(),用水溶解并稀释至100mL,有效期3个月。 盐酸溶液(1mol/L):(),用水稀释至100mL,混匀,有效期6个月。 碳酸钠溶液(100g/L):称取10g碳酸钠(),用水溶解并稀释至100mL,有效期6个月。 对硝基苯***溶液():***(),加5mL盐酸()超声溶解,用水稀释至200mL,混匀,置于4℃冰箱中保存,有效期3个月。 亚***钠溶液(5g/L):称取1g亚***钠(),用水溶解并稀释至200mL,混匀,有效期5:..犓犑2021023个月。 偶氮试剂:吸取1mL对硝基苯***溶液()和8mL亚***钠溶液(),混匀,临用前配制。 参考物质组***参考物质的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表2,纯度≥%。 注:或等同可溯源物质。表2 组***参考物质的中文名称、英文名称、犆犃犛号、分子式、相对分子质量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量组***Histamine5145 组***标准储备液(1mg/mL):准确称取适量组***参考物质(),置于10mL容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,混匀,配制成质量浓度为1mg/mL的组***标准储备液,置于-20℃冰箱中保存,有效期6个月。 注:组***标准溶液的配制浓度以组***单体计算,称取组***参考物质时应进行折算。组***参考物质:若为组***(CHN,),称取10mg;若为组***盐酸盐(CHN,2HCl,),称取59359317mg;若为组***磷酸盐(CHN·2HPO·H2O,),称取29mg。 材料水产品中组***快速检测试剂盒(比色卡法),需置于4℃冰箱中保存。13 电子天平:。 组织粉碎机。 离心机:转速≥4000r/min。 涡漩混合器。 移液器:200μL、1mL和5mL。14 温度15℃~30℃。 空气相对湿度≤80%。15 试样制备去头、骨、内脏、鱼皮,取约100g肌肉,用组织粉碎机充分粉碎混匀,均分成两份,分别装入洁净容器作为试样和留样,密封,标记,于-20℃保存。6:.. 试样提取准确称取试样2g±,置于15mL离心管中,加5mL三***乙酸溶液(),摇匀后,涡漩2min,4000r/min离心3min。,(),加入2mL正戊醇(),涡漩3min,4000r/min离心1min。,加入2mL盐酸溶液(),涡漩3min,4000r/min离心1min。取下层液作为提取液。 注:试样提取可按照试剂盒说明书进行操作,不做限定。 ,()摇匀,()混匀,放置10min。与标准色阶卡目视比色,10min内判读结果。需进行平行试验,两次测定结果应一致,即显色结果无肉眼可辨识差异。 质控试验每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。用色阶卡和质控试验同时对检测结果进行控制。 —2016《食品安全国家标准食品中生物***的测定》第一法液相色谱法检测不含组***的试样作空白试样。称取空白试样,。 加标质控试验准确称取空白试样2g±,置于15mL离心管中,加入400μL组***标准储备液(1mg/mL)(),使试样中组***含量为200mg/kg,***乙酸溶液(),“摇匀后,涡漩2min……”。16 结果判定观察待测液的颜色,与标准色阶卡比较判读样品中组***的含量。颜色浅于检出限(200mg/kg)则为阴性样品;颜色深于检出限的根据颜色的深浅进行判读。对于高组***鱼类(鲐鱼、鱼、竹荚鱼、鲭鱼、?鲣鱼、金枪鱼、秋刀鱼、马鲛鱼、青占鱼、沙丁鱼等青皮红肉海水鱼),当测定结果≥400mg/kg时,判定为阳性;对于其他海水鱼类,当测定结果≥200mg/kg时,判定为阳性。色阶卡见图2。图2 组***色阶卡质控试验要求:空白试验测定结果应为阴性,加标质控试验测定结果应与加标量相符。7:..犓犑20210217 结论由于色阶卡目视判读存在一定误差,为尽量避免出现假阴性结果,读数时遵循就高不就低的原则。当测定结果为阳性时,应对结果进行确证。18 检出限200mg/kg。 灵敏度灵敏度≥95%。 特异性特异性≥85%。 假阴性率假阴性率≤5%。 假阳性率假阳性率≤15%。 注:性能指标计算方法见附录A。19 其他本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便,在使用本方法时不作限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前,须对其进行考察,应满足本方法规定的各项性能指标。色阶卡应确保在试剂盒保质期内不出现褪色或变色的情况。—2016《食品安全国家标准食品中生物***的测定》第一法液相色谱法(包括所有的修改单)。本方法可能与酪***存在交叉反应,当结果判定为阳性时应对结果进行确证。8:..犓犑202102录规范性)定性方法性能指标计算表 1规定了文件中定性方法各个性能指标的计算方法。表犃. 定性方法性能指标计算表检测结果b样品情况总数a阳性阴性阳性犖犖=犖+=犖+=犖+犖犖=犖+犖犖=犖+犖或犖+..=(|犖-犖|-1)2/(犖+犖),显著性差异(2)12211221自由度(犱犳)=1灵敏度(狆+)/%狆+=犖/犖×(狆-)/%狆-=犖/犖×(狆犳)/%狆犳-=犖/犖×100=100-(狆犳+)/%狆犳+=犖/犖×100=100-/%(犖+犖)/(犖+犖)×. 注:犖:任何特定单元的结果数,第一个下标指行,第二个下标指列。例如:犖表示第一行,第一列;,犖表示所有的第二列;犖表示第一行,第二列。.212 a由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果。由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。b为方法的检测结果相对准确性的结果,与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。c本方法牵头单位:厦门市食品药品质量检验研究院。本方法胶体金免疫层析法起草单位:厦门市食品药品质量检验研究院。胶体金免疫层析法验证单位:广东省食品检验所、深圳市计量质量检测研究院、南京工业大学(国家轻工业食品质量监督检测南京站)、广州市食品检验所、厦门市疾病预防控制中心。本方法胶体金免疫层析法主要起草人:骆和东、叶雅真、徐振林、张志成、刘耀慧、张世伟、雷红涛、汪开银、王宇。本方法偶氮试剂法起草单位:南京工业大学(国家轻工业食品质量监督检测南京站)。本方法偶氮试剂法验证单位:厦门市食品药品质量检验研究院、江苏省食品药品监督检验研究院、江苏省产品质量监督检验研究院、江苏省理化测试中心、南京市产品质量监督检验院。本方法偶氮试剂法主要起草人:熊晓辉、聂小林、汪开银、骆和东、徐春祥、周玮、高宏、肖有玉。9