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峰和相应的蓝色,Co-BDC色的TMB生成色氧化态的TMB,即Co-BDC具有氧化物酶的活性。,监测了一系列浓度的Co-BDC和TMB(1mmoWL)混合溶液在652an处的吸光度值随着时间的变化情况(图2B)。结果显示,在相同时间点下,Co-BDC浓度越大,652nm处的吸光度值越大,浓度越大反应速率越大。在0-40sf,652an处的吸光度随着时间的逐渐延长而增大,120s后吸光度基本不变,这可能是因为底物TMB随间的越来越多,120s时达到平衡。因此选择反应时间为44、。-BDC氧化物酶活性的,监测了Co-BDC(90Ry/mL)和TMB(1mmol/P)混合不同温度下(20?6°C)反应2m/后在652an处的吸光度值(图2C)。结果显示,随着反应体系温度的升高,Co-BDC的氧化物酶活性逐渐增强,当反应温度超过30C时,Co-BDC的氧化物酶活性开始下降。且在34-50C温度,氧化物酶活性的下降幅度较小64?6C温度,氧化物酶活性的下降幅度明显增大,因此选择的反应温度为34C。120120-DT8OHm40HT击X2345678pHvalue图2Co--li/ecatalyticactivityofCo-BDCA:UV-Visspectraofdifferentreactionsystems:Co-BDC(40r—mL)/TMB(1mmol/P)(blue/no),Co-BDC(blacklines),TMB(1mmol/P)(redline)(不同反应体系的紫外可见光谱:Co-BDC(40Ry/mL)/CMB(1mmol/P)(蓝线),Co-BDC(黑线),TMB(1mmol/P)(红线));B:theadsorUanceat652anofaceticacidbuffer()containing1mmol/PTMBanddiUere/te/tratiocsofCo-BDCwasdeterminedatmomtemperature(在室温下测定含1mmoWCTMB和不同浓度Co-BDC的醋酸缓冲液()在652an处吸光度随时间的变化情况);CandD:effectOpHandtemperatureonthecatalyticactivitpofCo-BDC(pH值和温度对Co-BDC的氧化物酶催化活性的影响)-BDC的氧化物酶活性和其他基于纳米材料的酶模拟物一样,也受pH值的影响。pH值对Co-BDC氧化物酶活性的影响可通过Co-BDC(90Ry/mL)/TMB(1mmol/P)体系在不同pH值缓冲液孵育2min所测得的652an处的吸光度值来评估(图2D)。结果显示,pH值对Co-BDC的氧化酶活性的影响较大。,随着pH值的增大,Co-BDC的氧化酶活性缓陵:..分析测试学报第卷;,Co-BDC的氧化酶活性随着yH值的增大反而下降。。如无特,此实验反应条。-BDC模拟酶活性的动力学研究为步评估Co-BDC的氧化物酶活性,实验氧化物酶的米氏动力学进行研究(图3)。结,Co-BDC的酶活性稳态动力学规律,经计算得Co-?s-1,Co-BDC较低的值,K越小,表明酶对该底物的亲越大,有利于酶促反应。因此Co-BDC对TMB具有较强亲,然氧化酶应食品、生物、医学等领较大研究前景。已有研究中,以Co为活性的纳米酶的氧化活性可Co3+/Co4+间的相25,2]。TMB显色反应后,TMB被氧呈蓝色,Co4+随后自还原为Co3+,生成的Co3+又自发被氧化成Co4+。因而推测Co-BDC的纳米酶活性可能是来自于Co3+/Co4+。------------(mmobL_1)l/TMB^mol-L-1)图3Ce--icsofCe-BDCA:icscuoe(动力学曲线-;B:docbtereciqocolplv)fittedbyA(A拟合的双倒数图)-BDC的氧化物酶活性建立了检测抗坏血酸的比色方法(图4),结果显示,反应体系在652nm处的吸光度值(A)随着抗坏血酸浓度(c,mol/L)的增大呈下降趋势,且在40?30pmol/C范围内吸光度与抗坏血酸浓度呈线性关系,线性方程为A二-(mol/L)+,相关系数(e2),呈无色(4A插图)且在652nm处无吸收峰。以3倍信噪比(S/N二3)。图4基于Ce--BDCoxidase-/beactivityA:ascordicacidconcentration-depegentUV-VisadsooUocspectra(含有不同抗坏血酸的紫外光谱),the/lustratedp/otecanreWec)thecolorchangeofthereactionsystemwiththeincreaseofascordicacidconcentotion(体系颜色变化ynaaxue图片-;B:thecvoeofascordicaciddeterminedbyUV-Visspectoscopy(抗坏血酸测量曲线-,insed:/lustrationp/oteisca/uoe(标准曲线-:..第期杨阳等:基于Co-BDC的氧化物酶活性检测果汁中抗坏血酸的比色方法研究3选择性研究考虑汁样品中可些物质干扰抗坏血酸的检测,因此选择果汁中的常见离子(K*、Na*、Ni2*、Mn2*、Cu2*、My2*、Cv2*、Fo2*)、柠檬酸(CA)、酒石酸(TA)、糖类(果糖、蔗糖)、氨(谷、天冬)进行抗实验。于Co-BDC和TMB的()),分别添加抗(20RmoWC))他物质(200RmoWL),,2min后可见光吸收扫描(图5)o结,49量的物质基本不抗的测定,表明方法图5抗坏血酸检测的选择性测试抗具有良好的选择性。/min离心4min,去,稀释50倍,在反应体系中加入Co-BDC、TMB以及一系列不同浓度的抗坏血酸标准溶液(0、10、4、20RmoWL),于2min,分度计扫描反应340?60an下的吸收,取波长为652an处样品的吸光度,实验平行5次。结:5,、、,%?102%,相对标准偏差(RSD)%?%。该结果与抗坏血酸试剂盒(MAK074,Sigma)的检测结果(、、)能够较好地吻合,表明方可汁抗量的准测定。3本文以对苯二甲酸(HBDC)为有机配体,Co为活性金属中心制备了一种具有氧化物酶活性的Co-BDC,利用Co-BDC可以催化显色底物TMB生成氧化反应产物oxTMB,然后抗坏血酸可将oxTMB还原,反应过程中oxTMB的消耗导致652an处吸光度的下降,从而建立了抗的比色检测方法。该色方法具有检测成本低、操作简单、灵敏、迅速、选择性好等优点,为抗的检测方法。参考文献:[]Gi//thsHR,.,2001,10(4):43-182.[2]PingJF,WnJ,WangYX,.,2012,34(I):70-76.[]Ne/Ue/orS,JoossK,FlottmannD,Scri/oG,Ne/.,2017,44:122-129.[4]TotA,,2007,853:214-222.[]DuanJX,YuJ,FengSL,,2016,43:332-]WnF,HuangT,HuYJ,YangX,OnyangYJ,,2217,43:2539-]WnJJX,WangXY,WangQ,LoaZP,LiSR,ZdnYY,QUL,.,,2217,43(4):1004-]Goe/ecTA,LinJ,WnYF,Sni2Y,ZdangX,HuppJT,,2222,56(72):10446-]DengYY,WnYN,CdecGQ,Zde/gXL,DeiM,.,2020,dot:o//..[0]AiLH,LiLL,ZdangCH,FnJ,.,2017,17:15105-15108.[1]LinFF,HoJ,ZengML,HaoJ,GuoQH,SongYH,.,2017,18:106.[12]YangHG,YangRT,ZdangP,QinYM,CdecT,,2017,44:4629-4635.[3]YinYQ,GeeCL,XiaoQ,LinG,LinZ,CatZW,,2217,8:29052—29061.[10]HuZM,JiangX,XuFJ,JicJ,LongZ,,2217,48:276-282.[5]LuoLP,HuangLJ,LinXN,ZdangWT,YoeXL,DoLN,ZdangX,NiacY,SunJ,?Chem.,2019,58:1482-146.[6]ZdangX,YangQ,LangYH,JiangX,.,2020,92(4):12400-12406.[7]Zde/gJ,CdecZ,FangJF,WangZ,,2022,38(9):933-940.(责任编辑:周启动)