文档介绍：该【《血红蛋白的提取和分离》名师教案 】是由【帅气的小哥哥】上传分享，文档一共【6】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【《血红蛋白的提取和分离》名师教案 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。1/、【课题目标】知识与能力目标1、尝试从血液中提取和别离血红蛋白。2、说出色谱法、电泳法等别离生物大分子的根本原理。学科素养1、根底知识〔从血液中提取和别离血红蛋白;色谱法、电泳法等别离生物大分子的根本原理〕;2、根本技能〔通过体验血红蛋白提取和别离的实验的严格要求,注意按照操作提示进行相关步骤,培养学生理论联系实际的能力〕;3、根本思想〔通过体验血红蛋白提取和别离的实验的严格要求,初步形成科学的思维方式,开展科学素养和人文精神〕;4、根本活动经验〔通过色谱法、电泳法等别离生物大分子的根本原理的学****关注学生科学态度的教育,拓展学生视野〕。二、【课题重点】凝胶色谱法的原理和方法三、【课题难点】样品的预处理;色谱柱填料的处理和色谱柱的装填四、【教学方法】启发式教学五、【教学工具】多媒体课件六、【教学过程】〔一〕引入新课蛋白质是生命活动的主要承担者,是细胞内含量最高的有机化合物。对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。怎样提取蛋白质呢?2/7〔二〕:形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别,由此提取和别离各种蛋白质。〔分配色谱法〕:〔1〕原理:〔图5-13a〕分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙,路程短,流动快;分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部,路程长,流动慢。〔2〕凝胶材料:多孔性,多糖类化合物,如葡聚糖、琼脂糖。〔3〕别离过程:〔图5-13b〕混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子*洗脱:从色谱柱上端不断注入缓冲液,促使蛋白质分子的差速流动。〔1〕原理:由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成〔如H2CO3-NaHCO3,NaH2PO4/Na2HPO4等〕,调节酸和盐的用量,可配制不同pH的缓冲液。〔2〕缓冲液作用:抵抗外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。:〔1〕原理:不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同,在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同,导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。[思考]阅读教材后,填写下表:〔2〕别离方法:琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰***凝胶电泳等。〔优教提示:翻开素材实验演示:琼脂糖凝胶电泳〕4/7〔3〕别离过程:在一定pH下,使蛋白质基团带上正电或负电;参加带负电荷多的SDS,形成“蛋白质-SDS复合物〞,使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。〔优教提示:翻开素材实验演示:血红蛋白的提取和别离〕?样品处理、粗别离、纯化、纯度鉴定。思考:是否所有种类的蛋白质的提取和别离都是这样的?为什么?不是。因为蛋白质的来源和性质不同,别离方法差异很大。〔1〕你认为鸟类血液和哺乳动物血液中,最好哪种血液来提取血红蛋白?为什么?哺乳动物血液。因为该细胞中没有细胞核,血红蛋白含量高。〔2〕请阅读教材,认识哺乳动物血液组成及血红蛋白性质。并思考答复以下问题:血液由和两局部组成。血细胞中细胞数量最多,细胞的含量最高的化合物是。该化合物是由和构成的,其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的基团。:洗涤红细胞、释放血红蛋白、别离血红蛋白、透析。洗涤红细胞的目的是什么?除去血浆蛋白的杂蛋白,有利于后续步骤的别离纯化。红细胞的洗涤过程为血液+柠檬酸钠→低速短时离心→吸出上层血浆→红细胞+5倍体积生理盐水→缓慢搅拌10min→低速短时离心→吸出上清液→反复洗涤直至上清液无黄色思考:参加柠檬酸钠有何目的?为什么要低速、短时离心?为什么要缓慢搅拌?防止血液凝固;防止白细胞沉淀;防止红细胞破裂释放出血红蛋白。思考:你有什么方法将红细胞中的血红蛋白释放出来?参加蒸馏水,用玻璃棒快速搅拌一段时间。补充:参加蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。参加甲苯的目的是溶解细胞膜,有利于血红蛋白的释放和别离。此时,红细胞破碎混合液中不仅含有血红蛋白,而且还含有细胞破碎物、脂质、甲苯有机溶剂等。怎样除去这些杂质呢?由于它们的密度不同,科学家采取了离心别离的方法:4/7红细胞破碎混合液→中速长时离心〔2000r/min×10min〕→滤纸过滤除去脂质→分液漏斗别离出血红蛋白。?。透析。半透膜的选择透过性,大分子物质不能通过半透膜,离子和小分子能够通过半透膜。在透析过程中,血红蛋白溶液中的离子和小分子不断通过半透膜扩散进入到pH=7的磷酸缓冲液中。思考:为何使用pH=7的磷酸缓冲液?为什么缓冲液量远多于血红蛋白溶液量?维持血红蛋白的正常特性。有利于杂质分子充分地向外扩散。总结:通过以上四个根本过程,红细胞中的血红蛋白就被提取出来。但其中还含有其他种类的蛋白质分子〔如呼吸酶等〕。怎样将杂蛋白与血红蛋白别离开来呢?我们来研究蛋白质提取和别离的第二个步骤――粗别离〔凝胶色谱操作〕。:制作色谱柱、装填色谱柱、样品参加和洗脱。根据教材图5-19,说出制作色谱柱需要的材料。橡皮塞2个、打孔器、小刀、移液管、尼龙纱、尼龙网、玻璃管、尼龙管等。色谱柱的制作过程:准备材料→加工橡皮塞→安装色谱柱下面进行第二步――凝胶色谱柱的装填。请阅读教材:色谱柱的装填过程。步骤操作要求①操作要求色谱柱垂直固定在支架上②计算称量凝胶根据色谱柱体积计算凝胶用量③配制悬浮液凝胶颗粒+蒸馏水→充分溶胀凝胶颗粒+洗脱液→沸水浴④装填悬浮液一次性缓慢倒入;轻轻敲打⑤缓冲液洗涤平衡立刻用磷酸缓冲液洗涤平衡12h样品参加和洗脱。其根本过程是:调节缓冲液面→参加蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质6/7至此,血红蛋白即可得到粗别离。在整个操作过程中,应当注意以下事项:〔1〕红细胞的洗涤:洗涤次数不能过少;低速、短时离心。〔2〕凝胶的预处理:沸水浴法时间短,还能除去微生物和气泡〔3〕色谱柱的装填:装填尽量紧密,降低颗粒间隙;无气泡;洗脱液不能断流。〔4〕色谱柱成功标志:红色区带均匀一致地移动。〔三〕课堂总结、点评〔四〕实例探究〔优教提示:翻开优教****题课堂训练-?血红蛋白的提取和别离?,使用互动答题卡,更快更便捷的掌握学生的知识学****情况〕。七、【课余作业】1、你能描述血红蛋白别离的完整过程吗?2、与其他真核细胞相比较,红细胞有什么特点?这对你进行蛋白质的别离和提取有什么意义?八、【教学体会】本课题重在让学生了解生物科学在蛋白质领域的进展,说明提取、别离高纯度的蛋白质的重要性和必要性,并学****一些蛋白质别离和提取的根本技术。教师可以发挥学生的主动性,让学生介绍当前有关蛋白质研究的新进展,激发学生的学****兴趣,然后指出本课题的学****意义,让学生初步体会别离纯化蛋白质的过程和方法。