文档介绍：该【《外周血DNA的提取》 】是由【相惜】上传分享，文档一共【15】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【《外周血DNA的提取》 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。外周血中DNA的提取与鉴定实验目的掌握人全血DNA提取的原理和操作步骤。了解DNA根本理化性质。。编辑课件实验原理1保证DNA一级结构的完整性;2其他生物分子如蛋白质、多糖和脂类等分子的污染应尽量降低到最低;3尽量去除对后续分子实验有抑制作用的有机溶剂和重金属离子;4其他核酸分子RNA,应根据实际需要处理。DNA提取总的原那么编辑课件实验原理理论上所有真核细胞、原核细胞、病毒等都可以提取DNA。样本选择取决于实验目的。全血是基因组提取中最常见的样本之一。样本来源编辑课件理化性质核酸是由碱基、戊糖及磷酸组成的生物大分子,分为脱氧核糖核酸〔DNA〕和核糖核酸〔RNA〕两类。,属于***化合物,但是磷酸基的酸性较强,所以核酸总体上表现为酸性,带负电荷。,微溶于水,其钠易盐溶于水,而不溶于乙醇、苯酚、***仿、***等有机溶剂。核酸是高分子化合物,粘度很大。,其最大吸收峰在260nm处,常以A260表示。编辑课件实验原理生物的大局部或几乎全部的DNA都集中在细胞核或核质体中,人与动物的DNA主要存在于细胞核中,并与蛋白质结合的构成大小不一的染色体。所以蛋白质是DNA提取过程中常见的污染之一,而且蛋白质污染常常影响到以后的DNA操作过程,因此提取过程中要把蛋白质去除。编辑课件实验原理本实验中DNA提取采用的是苯酚/***仿抽提的方法。根本原理就是苯酚、***仿对蛋白质有极强的变性作用,而对DNA却没有影响。经苯酚/***仿抽提后,酚/***仿相与水相完全分层,蛋白质变性而被离心沉降到酚/***仿相和水相的界面,DNA那么留在水相。标本中的脂类杂质溶解于酚/***仿相,从而与水相别离得以去除。编辑课件实验原理此方法提取得到的DNA可能会有RNA杂质,但是RNA极易降解。而且少量的RNA对DNA的后续操作没有大的影响,如有必要可以参加不含DNA酶的RNA酶去除RNA的污染。,按照1:5~1:10的比例参加去离子水裂解8min,然后1700rpm/min离心,去掉含有红细胞碎片的上清液,重复裂解一次,留取白细胞沉淀。编辑课件实验步骤DNA细胞裂解液():150mmol/LNaCl、10mmol/LTris-HCl、10mmol/LEDTA、%SDSDNA细胞裂解液中SDS的是外表活性剂,主要作用裂解细胞膜、核膜,使核膜里与蛋白质结合的核酸释放到溶液里面。另外,Tris盐的作用是使抽提的出来的DNA容易进入水相,减少在蛋白质层的滞留。。编辑课件