1 / 10
文档名称:

040分枝杆菌菌种鉴定标准规程.pdf

格式:pdf   大小:997KB   页数:10页
下载后只包含 1 个 PDF 格式的文档,没有任何的图纸或源代码,查看文件列表

如果您已付费下载过本站文档,您可以点这里二次下载

分享

预览

040分枝杆菌菌种鉴定标准规程.pdf

上传人:青山代下 2024/5/21 文件大小:997 KB

下载得到文件列表

040分枝杆菌菌种鉴定标准规程.pdf

相关文档

文档介绍

文档介绍:该【040分枝杆菌菌种鉴定标准规程 】是由【青山代下】上传分享,文档一共【10】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【040分枝杆菌菌种鉴定标准规程 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。:..文件编号:上海市肺科医院检验科FKJYK-ZD-WS-XU-040分枝杆菌菌种鉴定方法页码:第19页,共1页作业指导书版本:2012/0生效日期:2012-01-:::与药物敏感试验相同,10-2mg/ml菌液,。37℃孵育,每周观一次,快速生长非结核分枝杆菌一周内可生长菌落,缓慢生长分枝杆菌,四周报告结果。与药物敏感性试验同步进行。--结核分枝杆菌-+非结核分枝杆菌++参考文献:结核病诊断细菌学检验规程[键入文字]:..文件编号:上海市肺科医院检验科FKJYK-ZD-WS-XU-040分枝杆菌菌种鉴定方法页码:第20页,共1页作业指导书版本:2012/0生效日期:2012-01-:临床分离分枝杆菌菌株,经PNB、TCH等鉴别培养基初步鉴定后,确定为非结核分枝杆菌者或药物敏感试验耐PAS的分离菌株,以及临床提出需作菌种鉴定的菌株,可按下列方法进行系统鉴定。-2mg/,分别置于37℃;45℃和28℃孵育,一周之内生长菌落者为快速生长分枝杆菌。一周后生长者为缓慢生长分枝杆菌。,一支用锡纸或黑纸包缠密封,另一支不包纸,二者一起放入37℃孵育,待不包纸管长出菌落时,开启包纸管观察,有色素产生为暗产色菌。无色素者,开启试管胶塞通气,以100瓦钨灯泡在相距450cm处照射2—3h,继续放37℃孵育3天,每天观察一次,产生色素者则为光产色菌。不论照光与否,菌落均无色素产生者为不产色菌。(1)原理:有些分枝杆菌经68℃处理后,产生的过氧化氢酶仍保持活性,可分解过氧化氢。(2)试剂:a)(PB)b)30%过氧化氢溶液(H0)22c)10%吐温一80溶液121℃10min灭菌,4℃保存。(3)方法:取生长在改良罗氏培养基3—4周的菌落磨菌比浊制备10mg/ml菌悬液,(1),放入68℃水浴20min,待冷却[键入文字]:..文件编号:上海市肺科医院检验科FKJYK-ZD-WS-XU-040分枝杆菌菌种鉴定方法页码:第21页,共1页作业指导书版本:2012/0生效日期:2012-01-04后,缓缓滴加37%H0与10%吐温-(此液临用前配制)。22(4)结果:持续有小气泡产生者为阳性。10—20min仍无气泡者为阴性。空白试剂对照无气泡产生。(5)对照菌株:堪萨斯分枝杆菌为阳性。结核分枝杆菌为阴性。(1)原理:某些分枝杆菌产生硝酸盐还原酶。使硝酸盐还原为亚硝酸盐,在酸性条件下与氨基苯磺胺,N-萘乙烯二胺盐酸盐形成偶氮化合物,菌液呈红色为阳性,不变色为阴性。(2)试剂:a)硝酸盐溶液NaNO:,,121℃20min灭3菌,每管分装2ml。b)二倍稀释浓HCLc)%氨基苯磺胺水溶液(新鲜配制)d)%N-萘乙烯二胺盐酸盐水溶液,4℃保存。(3)方法:取生长在改良罗氏培养基3—4周的菌落磨菌比浊制备10mg/ml菌悬液,(1)内,放37℃水浴2h,取出每管加试剂(2)一滴。再加试剂(3)和(4)各2滴。(4)结果:1min呈红色者为阳性,无色者为阴性。空白试剂对照为无色。(5)对照菌株:结核分枝杆菌为强阳性,(1)原理:某些分枝杆菌有一种酯酶,可分解吐温—80为油酸等物质,使菌液由琥珀色变为紫红色。(2)试剂:—,%中性红溶液2ml,混匀,121℃20min灭菌,每管分装3ml,4℃保存,限2周内使[键入文字]:..文件编号:上海市肺科医院检验科FKJYK-ZD-WS-XU-040分枝杆菌菌种鉴定方法页码:第22页,共1页作业指导书版本:2012/0生效日期:2012-01-04用。(3)方法:取在改良罗氏培养基生长3—4周的菌落磨菌比浊制备10mg/ml菌悬液;,置37℃孵育10天,第3、5、10天观察颜色变化。(4)结果:菌液由琥珀色变为紫红色者为阳性,不变者为阴性。空白试剂对照不变色。(5)对照菌株:堪萨斯分枝杆菌为阳性,痈病分枝杆菌为阴性。(1)原理:某些分枝杆菌产生尿素酶,分解尿素,菌液呈红色。(2)试剂:a)℃20min灭菌,4℃保存。b)取试剂(1)%尿素溶液,,每管分装3ml。c)%酚红:,加水至100ml,113℃10min灭菌。(3)方法:取在改良罗氏培养基生长3—4周的菌落磨菌比浊制备10mg/m1菌悬液,(2)内,每管加试剂(3)1滴,置37℃孵育三天,观察结果。(4)结果:菌液呈红色者为阳性,不变色为阴性。空白试剂对照不变色。(5)对照菌株:结核分枝杆菌呈阳性,瞻赊分枝杆菌呈阴性。(1)原理:某些分枝杆菌产生芳香硫酸酯酶能分解二硫酸酚酞三钾盐,游离出酚酞,在碱性情况下呈现紫红色。(2)试剂:[键入文字]:..文件编号:上海市肺科医院检验科FKJYK-ZD-WS-XU-040分枝杆菌菌种鉴定方法页码:第23页,共1页作业指导书版本:2012/0生效日期:2012-01-04a)二硫酸酚酞三钾盐溶液二硫酸酚酞三钾盐(),加入100ml苏通氏液体培养基,混匀,121℃15min灭菌,每管分装2m1。b)%碳酸钠水溶液(3)方法:取在改良罗氏培养基生长3—4周的菌落磨菌比浊制备20—40mg/m1菌悬液,取试剂(1)小管2支,,37℃孵育于第3天和第10天,各取1支加试剂(2),观察颜色变化。(4)结果:菌液呈紫红色者为阳性,不变者为阴性。空白试剂对照不变色。(5)对照菌株:偶然分枝杆菌为阳性,结核分枝杆菌为阴性,(1)原理:某些分枝杆菌有还原铁盐的能力,铁离子被吸收,菌落呈铁锈色。(2)试剂:4%拘椽酸铁铵水溶液,121℃15min灭菌,每管分装1ml,4℃保存,3周内使用。(3)方法:取在改良罗氏培养基生长3—4周的菌落磨菌,,(接种前吸弃管内凝固水),加入试剂lml于培养基底部,管塞插针头通气,37℃孵育3周,每周观察一次。(4)结果:菌落呈铁锈色者为阳性,不变者为阴性。(5)对照菌株:偶然分枝杆菌为阴性,龟分枝杆菌为阴性。(1)原理:某些分枝杆菌可使蹄盐还原为金属筛,使培养物呈黑色或深棕色沉淀物。(2)试剂:a)%亚蹄酸钾水溶液,121℃15min灭菌。·b)%苏通氏琼脂培养基,121℃15min灭菌,每管分装3ml。(3)方法:取在改良罗氏培养基生长3—4周的菌落,磨菌比浊制备1mg/ml菌[键入文字]:..文件编号:上海市肺科医院检验科FKJYK-ZD-WS-XU-040分枝杆菌菌种鉴定方法页码:第24页,共1页作业指导书版本:2012/0生效日期:2012-01-04悬液,,37℃孵育7天,加亚蹄酸钾液2滴,再孵育3天,观察结果。(4)结果:有黑色或深棕色沉淀物为阳性、无沉淀物为阴性。空白试剂对照无变化。(5)对照菌株:胞内分枝杆菌为阳性,次要分枝杆菌为阴性。(1)原理:结核分枝杆菌缺乏烟酸酶,不能分解代谢过程中产生的烟酸。因此结核分枝杆菌产生烟酸量较牛分枝杆菌及其它非结核分枝杆菌高。烟酸吡啶核环的氮与联苯胺及溴化氰作用,呈现桃红色或红色沉淀。(2)试剂:a)3%联苯胺乙醇溶液,b)10%溴化氰溶液(剧毒!在通风橱内配制)。c)将试剂(1)和(2)分别放入褐色瓶中,密封瓶口,4℃可保存2周。(3)方法:取在改良罗氏培养基生长3—4周的菌株一支,加沸水2ml于培养基斜面,振荡5-10次后,平放台上5—10min。,,各加试剂(1),其中一管再加试剂(2),观察菌液变化。(4)结果:试剂(1)、(2)二液的管内菌液呈红色或桃红色沉淀者为阳性,白色沉淀为阴性。空白试剂对照不变色。(5)对照菌株:结核分枝杆菌为阳性。牛分枝杆菌为阴性。(6)说明:a)烟酸含量在2ug以上才能出现阳性结果,故菌株菌落必须在50个以上,)溴化氰液如发生沉淀,用前放室温待溶解后再用。c)对INH高度耐药的结核分枝杆菌,其结果可呈假阴性。[键入文字]:..文件编号:上海市肺科医院检验科FKJYK-ZD-WS-XU-040分枝杆菌菌种鉴定方法页码:第25页,共1页作业指导书版本:2012/0生效日期:2012-01-04d)试验完毕后在试管中加等量4%NaOH溶液24h后方可消除溴化氰毒性。%NaCl培养基在改良罗氏培养基中按5%(W/V)加入NaCl。(1)方法:接种10-2mg/,37℃孵育,每周观察一次至第四周,以改良罗氏培养基为对照。(2)结果:对照管及试验管均生长菌落为阳性,仅对照管生长为阴性。快速生长分枝杆菌不产色菌中龟分枝杆菌龟亚种为阴性。、、、MgSO·7HO05g、、丙三醇3ml溶于蒸馏水97ml,以10%—,加琼脂3g,121℃20min灭菌,每管分装7ml,成斜面。(1)方法:取l-2mg/,37℃孵育两周(2)结果:有菌落生长为快速生长菌。龟分枝杆菌龟亚种不生长。龟分枝杆菌脓肿亚种可生长,二者可依此鉴别。、MgSO·、,溶解于蒸馏水1000ml4224中,以10%—,加入琼脂20g,121℃20min灭菌,按1%比例加入灭菌葡萄糖液,每管分装7ml,成斜面。(1)方法:取lmg/,同时接种改良罗氏培养基作为对照,放37℃孵育3周观察结果。(2)结果:胞内分枝杆菌生长,乌分枝杆菌不生长。(不含Nacl),5一11天观察生长情况(平皿放于铺湿纱布的带盖容器中)。[键入文字]:..文件编号:上海市肺科医院检验科FKJYK-ZD-WS-XU-040分枝杆菌菌种鉴定方法页码:第26页,共1页作业指导书版本:2012/0生效日期:2012-01-04结果:凡生长菌落经涂片抗酸染色为抗酸菌者判为阳性,无菌落生长或非抗酸杆菌者为阴性。偶然分枝杆菌及龟分枝杆菌为阳性,千田分枝杆菌,塞内加尔分枝杆菌、耻垢分枝杆菌等非产色快速生长分枝杆菌为阴性。、2、3表1光产色分枝杆菌鉴别表光硝酸盐尿素吐温分枝杆菌37℃缓慢耐热触产还原试酶-80水菌名生长生长酶试验色验试验解试验堪萨斯分++黄++++枝杆菌++黄+-++海分枝杆菌△猿猴分++黄+-+-枝杆菌有暗产色菌表2暗产色分枝杆菌鉴别表暗硝酸盐尿素吐温分枝杆菌37℃缓慢耐热触产还原试酶-80水菌名生长生长酶试验色验试验解试验瘰疬分枝++++++橙杆菌戈登分枝++橙+-++杆菌△苏加分++橙+-++枝杆菌△照光25℃产色[键入文字]:..文件编号:上海市肺科医院检验科FKJYK-ZD-WS-XU-040分枝杆菌菌种鉴定方法页码:第27页,共1页作业指导书版本:2012/0生效日期:2012-01-04表3不产色分枝杆菌鉴别表37℃缓色耐热触硝酸盐尿素吐温芳香硫分枝杆菌生长慢素酶试验还原试酶-80水酸酯酶菌名产生验试验解试验试验生长鸟-胞内分枝++-+---+杆菌蟾蜍分枝杆菌++++---+△溃疡分枝杆++-+----菌土地分枝杆菌++-++-++胃分枝杆菌++---+++℃快色耐热触硝酸盐芳香5%铁离子速硫酸生长素酶试验还原试Nacl吸收菌名酯酶生产验生长试验生试验长偶然分枝杆菌++-++++龟分枝杆菌++-+-+--龟亚种龟分枝杆菌++-+-++-脓肿亚种+++++-++耻垢分枝杆菌+++++-++草分枝杆菌+++++dd+母牛分枝杆菌d=有的菌株阳性,有的阴性。[键入文字]:..FKJYK-ZD-WS-XU-040分枝杆菌菌种鉴定方法页码:第28页,共1页作业指导书版本:2012/0生效日期:2012-01-04菌种鉴定临床分离菌株↓抗酸染色(+)↓+(-)培养基+++PNB培养基--+TCH培养基+-非结核分支杆菌结核分支杆菌牛型快生长菌慢生长菌↓↓生化反应观察色素,生化反应-硝酸++↓↓↓↓-吐温+-光产色暗产色不产色-耐热触酶↓↓↓↓↓↓↓龟黄耻+硝酸--尿素+-+尿素--T-80+脓色垢+还原--吐温-+-硝酸-+28℃+肿草↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓偶堪海蟾瘰戈溃鸟胞海胃(49%)疡内(51%)参考文献:结核病诊断细菌学检验规程[键入文字]