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进行HLA—ⅠⅡ。5h完成HLA-ⅠⅡ类抗原一类分型的新方法,还可应用免疫磁珠分离技术进行肾移植供受体的HLA分型、探讨血液病患者反复血小板输注的治疗效果与HLA之间的相关性。7。用作靶向释药系统的载体免疫磁性微球作为靶向释药系统的载体可使免疫磁性微球上的抗癌药物更易与癌细胞接触,服用这种制剂后,在体外适当部位用一适宜强度的磁铁,将磁性微球引导到体内特定靶区,提高了杀伤癌细胞的效果。很多研究者使用不同的方法制成了针对不同癌细胞的免疫磁性微球,作为靶向释药系统的载体并在实验中证实这种释药载体具有良好的功效。免疫磁珠分离技术的应用实例免疫磁珠分离技术在食品安全检测中的应用免疫磁珠对病毒具有特异选择性,因此能用于食品有害微生物的检测。免疫磁珠技术与常规检验方法相比具有检测迅速、有选择性分离目的微生物,有效减少背景干扰,提高了精准性。同时还能捕获受损伤靶细菌。目前,∶H7所采用的直接分离法存在着鉴别力差、抑制杂菌能力弱、耗时长、,能够快速地从各种食品样品中分离富集E。coliO157∶H7,满足流行病学的研究要求和提高控制力度。现在这种免疫磁珠的方法已经被英国公共健康服务实验室认定为标准的分离方法,我国也已将免疫磁珠法对大肠杆菌O157的检测纳入国家标准(GB/T4789。36—2008)和出入境检验检疫行业标准(SN/T1059。5-2006)。已有市售的专用免疫磁珠销售。具体操作1增菌2免疫磁珠捕获与分离1。将Eppendorff管按样品和质控菌株进行编号,每个样品使用1支Eppendorff管,然后插人到磁板架上。在漩涡混合器上轻轻振荡E。coliO157免疫磁珠溶液后,用开盖器打开每支Eppendo—rff管的盖子,每管加人20μLE。coli0157免疫磁珠悬液。2。取mEC+n肉汤增菌培养物1mL,加人到Eppendorff管中,盖上盖子,,质控菌株必须与样品分开进行,避免交叉污染。:在18℃~30℃环境中,将上述Eppendorff管连同磁板架放在DynalMXl样品混合器上转动或用手轻微转10min,使E。coliO157与免疫磁珠充分接触。4。捕获:将磁板插人到磁板架中浓缩磁珠。在3min内不断地倾斜磁板架,确保悬液中与盖子上的免疫磁珠全部被收集起来,此时,在Eppendorff管壁中间明显可见圆形或椭圆形棕色聚集物。:取1支无菌加长吸管,从免疫磁珠聚集物对侧深人液面,轻轻吸走上清液。当吸到液面通过免疫磁珠聚集物时,应放慢速度,以确保免疫磁珠不被吸走。如吸取的上清液内含有磁珠,则应将其放回到Eppendorff管中,。:洗涤免疫磁珠混合物,重复上述步骤4~6和4~:将免疫磁珠重新悬浮在100μLPBS—Tween20洗液中。8。涂布平板:用漩涡混合器将免疫磁珠混匀,用加样器各取50μL免疫磁珠悬液分别转移至CT—SMAC平板和改良CHROMagarO157弧菌显色琼脂平板一侧,再用无菌涂布棒将免疫磁珠涂布平板的一半,用接种环划线接种平板的另一半。待琼脂表面水分完全吸收后,翻转平板,于36℃士10℃培养18--—24h。菌落识别在CT—SMAC平板上,典型菌落为不发酵山梨醇的圆形、光滑、较小的无色菌落,中心呈现较暗的灰褐色;发酵山梨醇的菌落为红色;在改CHROMagarO157弧菌显色琼脂平板上为圆形、较小的菌落,中心呈淡紫色一紫红色,边缘无色或浅灰色。初步生化试验:在CT-SMAC和改良CHROMagarO157弧菌显色琼脂平板上挑取5个~10个典型或可疑菌落,分别接种TSI琼脂,同时接种MUG—LST肉汤,于36℃士1℃培养18h~。在TSI琼脂中,典型菌株为斜面与底层均呈阳性反应呈黄色,产气或不产气,不产生硫化氢(H2S)。置MUG-LST肉汤管于长波紫外灯下观察,无荧光产生者为阳性结果,有荧光产生者为阴性结果;对分解乳糖且无荧光的菌株,在营养琼脂平板上分纯,于36℃士1℃培养18h~24h,∶H7多克隆抗体连接到羊抗兔IgG包被的磁珠上,从食物增菌培养液中分离O157∶H7菌株,再将带菌的磁珠接种到培养基上,加入荧光素标记的O157∶H7抗血清,在荧光显微镜下观察,此法敏感性为10cfu/-免疫脂质体(IMB/IL)荧光试验方法,可在8h内快速检测出多种液态样品(水样、苹果汁、苹果酒)中低至1cfu/mL的E。coliO157∶H7,∶H7感染样本。结论免疫磁珠分离技术的优点是:分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单,不需昂贵仪器设备,不影响被分离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能等,:免疫磁珠敏感性不高,易于其他杂菌交叉反应,价格昂贵,应用受到一定限制。免疫磁珠分离技术的发展方向:高敏感性磁珠的制造技术,降低磁珠生产成本,免疫磁珠与其它检测手段联用技术,免疫磁珠技术应用技术,总的来说,免疫磁珠分离技术未来将在生物医学、食品、农业科研、(北京医科大学人民医院妇科仲痴中心范蓉编译钱和年审阅)—-免疫磁珠分离技术(IMB)—熊国权1,-杨万,何苗