文档介绍：链霉素效价测定方案
试验目的: 1、设计链霉素效价测定方案
2、熟悉并掌握抗生素效价测定方法
试验器材:
双碟陶瓦盖钢管、钢管放置器、玻璃容器、毛细滴管、灭菌刻度吸管、称量瓶、恒温培养箱、万分之一天平、干燥箱、恒温水浴箱、显微镜、抑菌圈测量仪或游标卡尺、超净工作台、冰箱、酒精灯、接种环
供试品称量量:50mg
缓冲液:
磷酸盐缓冲液(),加水使成1000ml,摇匀滤过。121℃蒸汽灭菌30min备用。
培养基制备数量
1个供试品效价测定
4个用于预试验
5个每瓶100ml
1个用于预试验
1个供试品效价测定
2个每瓶250ml
7个三角瓶
营养琼脂培养基:100ml,作为菌种活化用。
双碟数量:8套(供试品效价测定)+8套(预试验)。共16副
小钢管:32个(供试品效价测定)+32个(预试验),共64个,每个双碟中放置4个。
操作步骤
菌种
1)枯燥芽孢杆菌【Bacillus subtilis (B) 63 501】
2)枯燥芽孢杆菌菌悬液的制备
菌液制备
取枯燥芽孢杆菌的营养琼脂斜面培养物,加灭菌水2ml冲下菌苔,制成悬液,用吸管将此悬液接种于营养琼脂培养基上,均匀摊布,在37℃培养7天,取菌苔少许涂片,用革兰染色镜检,应有芽孢85%以上。用灭菌水将芽孢洗下,制成芽孢悬液,合并至灭菌大试管内,65℃水浴内加热30min,将菌体杀死,待冷后放冰箱储藏为浓菌液。
供试品溶液的制备
供试品估计效价1000000U/,加水50ml,稀释制成1000U/ml溶液,吸取2ml加入100ml容量瓶中,,制成20U/ml溶液,吸取7ml加入100ml容量瓶中,, 吸取25ml加入50ml容量瓶中,,作为滴碟用供试品及标准品溶液。
培养基Ⅰ
胨5g 牛肉浸出粉3g
磷酸氢二钾3g 琼脂20g 水1000ml
除琼脂外,混合上述成分,,加入琼脂,加热溶化后滤过,~,在115
℃灭菌30min。
检菌为枯燥芽孢杆菌【Bacillus subtilis (B) 63 501 】
双碟的制备
预实验
将培养基用微波炉融化,保温使温度降至60℃左右,取8套已灭菌双碟,每套中加20mlⅠ培养基,作为底层。将另外四个装量为100ml的培养基,于58℃保温,30min底层凝固后