文档介绍：第八章放射免疫分析
本章考点
第一节概述
放射免疫分析是利用放射性核素可探测的灵敏性、精确性和抗原抗体反应特异性相结合的一种免疫技术。此技术灵敏度高(可检测到ng、p***平)、特异性强、重复性好、样品及试剂用量小是其优点,但核素的放射性,对工作人员和环境易造成危害或污染,是其缺点。
放射免疫分析常用的放射性核素有:125I、130I、3H、14C等。
放射免疫分析基本类型有:放射免疫分析(RIA)、免疫放射分析(IRMA)。广义上还应包括放射受体分析及放射配体结合分析。
第二节放射免疫分析(RIA)
(RIA)基本原理:其原理为标记抗原(Ag*)和非标记抗原(Ag)对有限量特异性抗体竞争性结合反应。
Ag*是试剂成分,而Ag是待测抗原,Ab也是试剂中成分。 Ag*和Ab的量是固定微量的,而待测的Ag量是不固定的。
解释:如果将Ag*-Ab复合物与游离(剩余的)Ag*分开,分别测定它们的放射性,就可算出结合态的标记抗原(B: Ag*-Ab复合物中的Ag*)与游离态的标记抗原(F: 单独、剩余的Ag*)的比值(B/F),或算出结合率[B/(B+F)],它们与待测Ag量呈函数关系(反比关系)。
:剂量反应曲线又称标准曲线,即用标准物浓度(Ag)对结合率[B/(B+F)]作图。在RIA中被测定物质的浓度(量)可从标准曲线上查得;同时标准曲线又是验证方法的灵敏度、检验抗血清质量和鉴定标准品纯度的主要依据。随着计算机的普及,可通过计算机的放免处理程序来绘制标准曲线。
:RIA测定方法分三个步骤即:①待测标本中未标记抗原,标记抗原和抗体进行竞争抑制反应;②将标记抗原和抗体相结合的复合物(B)和未结合的标记抗原(F)的分离(分离方法有第二抗体法、聚乙二醇沉淀法、PR法、活性炭吸附法等);③对B进行放射性强度的测定(B为标记抗原抗体复合物,F为游离标记抗原)。根据标准曲线查得待测抗原浓度。
说明:此辅导中图片均引自陶义训主编:免疫学和免疫学检验,人民卫生出版社,1995年9月第1版第4次印刷(版权归原作者,此处仅为授课之用,不作为出版物)
第三节免疫放射分析(IRMA)
免疫放射分析(IRMA)是从RIA基础上发展起来的核素标记免疫测定。其特点是用核素标记的抗体直接与受检抗原反应并用固相免疫吸附剂作为B或F的分离手段。
:IRMA属于非竞争性免疫结合反应,是将放射性核素标记抗体,用过量的标记抗体(Ab*)与待测抗原反应(反应式为Ag+Ab*=Ag-Ab*+Ab*)。待充分反应后,除去游离的标记抗体,Ag-Ab*+Ab*结合物的放射性强度与待测抗原呈正比关系
-8-1。
表4-8-1IRMA与RIA的异同点
RIA
IRMA
标记物质
核素标记抗原
核素标记抗体
反应速度
较慢
较快
反应模式
竞争抑制
非竞争结合
标准曲线的工作浓度
针对多克隆抗体特异性较低
针对单克隆抗体特异性较强
标准曲线的工作浓度
2~3数量级
3个数量级以上