1 / 3
文档名称:

fascin 1基因在食管癌细胞表达上调的鉴定及其功能的初步研究.doc

格式:doc   大小:13KB   页数:3页
下载后只包含 1 个 DOC 格式的文档,没有任何的图纸或源代码,查看文件列表

如果您已付费下载过本站文档,您可以点这里二次下载

分享

预览

fascin 1基因在食管癌细胞表达上调的鉴定及其功能的初步研究.doc

上传人:haha 2024/6/26 文件大小:13 KB

下载得到文件列表

fascin 1基因在食管癌细胞表达上调的鉴定及其功能的初步研究.doc

相关文档

文档介绍

文档介绍:该【fascin 1基因在食管癌细胞表达上调的鉴定及其功能的初步研究 】是由【haha】上传分享,文档一共【3】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【fascin 1基因在食管癌细胞表达上调的鉴定及其功能的初步研究 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。fascin1基因在食管癌细胞表达上调的鉴定及其功能的初步探讨Fascin1基因在食管癌细胞表达上调的鉴定及其功能的初步探讨2001级硕士探讨生:荣举导师:李恩民教授许丽艳副探讨员摘要食管癌是常见的恶性肿瘤,其发病机制至今不甚明白。有探讨发觉HPV感染与食管癌的发病有关,但原委起何作用并不清晰。为此,本探讨联合运用双向凝胶电泳、基质协助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)、RT-PCR、免疫印迹、反义核酸、裸鼠成瘤等技术手段对HPV18E6E7基因转染诱导的永生化食管上皮细胞SHEE及食管癌细胞SHEEmt之间的差异表达基因进行鉴定,并初步探讨了基因的功能,以期为揭示HPV在食管癌发病中的作用供应新线索。内容与方法:1、提取SHEE和SHEEmt细胞的总蛋白,双向凝胶电泳分别,考马斯亮蓝染色,PDQuest()软件分析双向凝胶电泳图确定差异表达蛋白,进行MALDI-TOF-MS鉴定。2、通过RT-PCR确定差异表达蛋白基因的转录水平,并通过cDNA克隆和DNA测序等赐予进一步确认。3、通过免疫印迹对SHEE和SHEEmt细胞中的差异表达蛋白进行验证;通过免疫组织化学检测差异表达蛋白在临床食管鳞癌、腺癌和正常食管上皮组织中的表达状况。4、在转录水平反义封闭SHEEmt和HeLa细胞中差异表达蛋白基因的表达,视察细胞生物学特性的改变规律,初步确定差异表达蛋白的功能。结果:1、双向凝胶电泳和MALDI-TOF-MS发觉,与SHEE中的比较,fascin1和磷酸丙糖异构酶在SHEEmt中在蛋白质翻译层面上表现上调。2、RT-PCR检测发觉,与SHEE中的比较,SHEEmt中fascin1和磷酸丙糖异构酶在mRNA转录层面上均表现上调,但相比之下fascin1mRNA的上调更明2显。测序结果显示,所扩增的fascin1基因片段的序列与GenBank上的fascin1基因一样。3、免疫印迹检测结果显示,与SHEE中的比较,fascin1蛋白在SHEEmt细胞中的表达水平明显增高;免疫组织化学检测fascin1在食管鳞癌和腺癌组织表达呈阳性,在正常食管上皮组织表达呈阴性,且部分正常食管上皮组织增殖旺盛的基底细胞表达呈阳性。4、-fascin(-),并胜利转染SHEEmt和HeLa细胞。5、在HeLa细胞中,反义封闭fascin1基因后,细胞的丝状伪足和微棘削减,表现为聚集生长。检测结果表明,fascin1基因在转录水平表现为明显下调,但在蛋白翻译水平相应性下调表现不明显。6、反义封闭fascin1基因表达对SHEEmt和HeLa细胞的生长周期未见明显影响,SHEEmt-fascin(-)和HeLa-fascin(-)细胞仍可在SCID小鼠成瘤。结论...